Методика поверки «Хроматографы жидкостные Vanquish, Vanquish Flex» (МП 205-13-2016)

УТВЕРЖДАЮ

Иванникова

ль директора по й метрологии «ВНИИМС”

Хроматографы жидкостные Vanquish, Vanquish Flex

Методика поверки

МП 205-13-2016

г. Москва 2016 г.

Настоящая методика распространяется на хроматографы жидкостные Vanquish, Vanquish Flex, изготавливаемые фирмой «Thermo Fisher Scientific Inc», США, фирмой «Thermo Fisher Scientific (Bremen) GmbH», Германия, фирмой «Dionex Softron GmbH a part of Thermo Fisher Scientific», Германия, и устанавливает методику их первичной и периодической поверки.

Интервал между поверками - 1 год.

1 ОПЕРАЦИИ ПОВЕРКИ

1.1 При проведении поверки выполняют операции, указанные в таблице 1. Таблица 1

Примечания:

''При отсутствии НД на МИ, утвержденной в установленном порядке по ГОСТ Р 8.563. ²⁾ При наличии НД на МИ.

• 1.2 Допускается проводить первичную поверку с детекторами, входящими в комплект хроматографа в соответствии с заказом.

• 1.3 Периодическую поверку допускается проводить по письменному заявлению владельца с теми детекторами, с которыми хроматограф эксплуатируется.

2 СРЕДСТВА ПОВЕРКИ

• 2.1 При проведении поверки применяют следующие средства поверки:

• - ГСО 7346-96 состава фенола, массовая концентрация фенола 1 г/дм³;

• - резерпин по ФС № 423267-96;

• - ГСО 8749-2006 состава раствора антрацена в ацетонитриле с аттестованным значением массовой концентрации 0,2 мг/см³, границы допускаемого значения относительной погрешности ±2 % (Р=0,95).

• - кофеин безводный по ФС 42-0249-07

• - колбы мерные наливные 2-100-2, 2-50-2, 2-1000-2, ГОСТ 1770-74;

• - пипетки градуированные 6-2-1,6-2-5, ГОСТ 29227-91(1);

• - весы лабораторные по ГОСТ OIML R 76-1-2011 с наибольшим пределом взвешивания 200 г;

• - ацетонитрил для жидкостной хроматографии, LC-MS № 34967 по каталогу Fluka;

• - вода для лабораторного анализа, ГОСТ Р 52501-2005;

• - дистиллированная вода LC-MS № 39253 по каталогу Fluka;

• - хроматографическая колонка Hypersil Gold Cl8 с размером частиц 3 мкм, длиной 100, диаметром 2,1 мм (допускается использовать аналогичные колонки других типоразмеров, при этом необходимо произвести корректировку скорости потока элюента);

• - инжекционный вентиль с петлей 2, 5, 10 и 20 мкл.

• 2.2 Все средства измерений, используемые при поверке, должны иметь свидетельства о поверке, ГСО - паспорта.

• 2.3 Допускается применение аналогичных средств поверки, обеспечивающих определение метрологических характеристик поверяемых СИ с требуемой точностью.

3 УСЛОВИЯ ПОВЕРКИ И ПОДГОТОВКА К НЕЙ

• 3.1 При проведении поверки соблюдают следующие условия:

  -температура окружающего воздуха, °C                              от 15 до 25

  • - атмосферное давление, кПа                                         от 84 до 107

  • - относительная влажность воздуха, %                                от 30 до 80

  • - напряжение питания переменного тока, В                            220(^'д)%

  -частота переменного тока, Гц                                         от 49 до 51

Подготовку к поверке хроматографов выполняют в соответствии с руководством по их эксплуатации.

3.2 Перед проведением поверки готовят контрольные растворы. Назначение растворов и содержание в них анализируемых компонентов приведены в таблице 2.

Таблица 2

4 ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ

Требования безопасности должны соответствовать рекомендациям, изложенным в Руководстве по эксплуатации жидкостных хроматографов с масс-спектрометрическими, диодноматричными, флуориметрическими детекторами и детекторами с переменной длиной волны.

5 ТРЕБОВАНИЯ К КВАЛИФИКАЦИИ ПОВЕРИТЕЛЕЙ

К проведению поверки допускаются лица, имеющие опыт работы с жидкостными хроматографами и изучившие руководство по их эксплуатации и методику поверки.

6 ПРОВЕДЕНИЕ ПОВЕРКИ

• 6.1 Внешний осмотр

При внешнем осмотре устанавливают:

• - соответствие комплектности приборов требованиям технической документации;

• - отсутствие внешних повреждений, влияющих на работоспособность хроматографов и детекторов;

• - исправность механизмов и крепежных деталей;

• - четкость надписей на лицевой панели.

• 6.2 Опробование

  • 6.2.1 Автоматическое тестирование

Запускают программу автоматического тестирования. Хроматографы допускаются к дальнейшей поверке, если результаты автоматического тестирования положительные.

• 6.2.2 Определение дрейфа и уровня флуктуационных шумов нулевого сигнала диодноматричного детектора DAD и детектора с переменной длиной волны VWD

Для проверки шума, дрейфа отключают колонку, водой промывают автосамплер (инжектор) и насос, колонку заменяют на стальной или полиэтиленовый капилляр (сталь марки 316 или материал РЕЕК) длиной 30-50 см и внутренним диаметром (0,1-0,3) мм.

Определение уровня флуктуационных шумов нулевого сигнала хроматографа с диодноматричным детектором DAD проводят после выхода детектора на режим (время прогрева не менее одного часа). В качестве элюента используют дистиллированную воду. Скорость потока элюента 1 мл/мин. После выхода хроматографа на режим в течение 30 минут записывают нулевой сигнал на длине волны 254 нм.

Уровень флуктуационных шумов нулевого сигнала (ДХ) принимают равным амплитуде (h) повторяющихся колебаний нулевого сигнала с периодом не более 20 секунд. Полученное значение уровня флуктуационных шумов не должно превышать 3-10“⁶ е.о.п. для диодноматричного детектора DAD и 2,5-10”⁶ е.о.п. для детектора с переменной длиной волны VWD.

Дрейф нулевого сигнала принимают равным наибольшему смещению среднего значения нулевого сигнала в течение 1 часа. Полученное значение дрейфа нулевого сигнала не должно превышать 0.5-10^-3 е.о.п. для диодно-матричного детектора и 0.1-10”³ е.о.п. для детектора с переменной длиной волны.

• 6.2.3 Определение предела детектирования хроматографа с диодно-матричным детектором DAD и детектора с переменной длиной волны VWD

Определение предела детектирования выполняют на хроматографе, укомплектованном аналитической колонкой.

Предел детектирования хроматографа определяют с использованием контрольных веществ, элюентов и условий, указанных в таблице 2. Скорость потока элюента 1 мл/мин.

В хроматограф водят пробу контрольного вещества, определяют высоту и ширину пика на половине его высоты цо,5-

Предел детектирования рассчитывают по формуле

2-AX-G

где G - количество контрольного вещества, г;

ДХ - уровень флуктуационных шумов нулевого сигнала, определенный до ввода контрольного вещества;

Н - высота пика контрольного вещества.

V - скорость потока элюента, см³/мин;

/л_{0 5} - ширина пика на половине высоты, мин;

ДХ и Н измеряют в мм, условных единицах или мВ.

где С - массовая концентрация контрольного вещества, мг/дм³; V_dO3 - объем введенной пробы контрольного вещества, мкл.

Полученное значение предела детектирования не должно превышать 2-10 ⁹ г/см³ кофеина или 6-10'⁹ г/см³ фенола.

• 6.2.4 Определение чувствительности (отношения сигнал/шум) хроматографа с масс-спектрометрическим детектором в режиме «электроспрей»

Контрольным веществом для всех масс-спектрометрических детекторов является резерпин. Массовую концентрацию раствора резерпина выбирают в соответствии с таблицей 2. В качестве элюента применяют смесь ацетонитрила с водой в объёмном соотношении 50:50.

Таблица 3

Устанавливают инжекционную петлю в инжекционный вентиль. Выбирают петлю, вместимость которой равна объему вводимой пробы, указанному в таблице 3. Устанавливают скорость потока элюента 400 мкл/мин и задают режим сканирования масс-спектрометрического детектора в соответствии с таблицей 3. Включают регистрацию масс-спектрометрических данных. С помощью шприца заполняют петлю контрольным раствором в соответствии с таблицей 3 и выполняют ввод содержимого петли в поток элюента из хроматографа.

Отношение сигнал/шум определяют с помощью системы обработки данных.

Прибор считается выдержавшим поверку, если полученные значения отношения сигнал/ шум не менее значений, приведенных в таблице 4.

Таблица 4

• 6.2.5 Определение чувствительности (отношение сигнал/шум) хроматографа с флуори-метрическим детектором FLD

Определение отношения сигнал/ шум флуориметрического детектора FLD выполняют на хроматографе с использованием Рамановского спектра рассеяния дистиллированной воды. В качестве элюента используют дистиллированную воду. Скорость потока элюента 1 мл/мин. С 1 по 23 минуту производят запись сигнала Рамановского спектра при длине волн возбуждения 350 нм и эмиссии 397 нм. С 23 по 45 минуту производят запись темнового тока при длине волн возбуждения 350 нм и эмиссии 450 нм.

Отношение сигнал шум определяют по формуле

S/N =

теми, ток

где Н _1>аиац - уровень сигнала Рамановского спектра; Н_{темнток} ~ уровень сигнала темнового тока;

Я ,  - уровень шума Рамановского спектра.

Полученное значение отношения сигнал/ шум должно быть не менее 550:1.

• 6.3 Определение метрологических характеристик

  • 6.3.1 Определение относительного среднего квадратичного отклонения (ОСКО) выходного сигнала

Определение метрологических характеристик выполняют на хроматографе, укомплектованном аналитической колонкой с использованием контрольных растворов, элюентов и условий, указанных в таблице 2. Скорость потока элюента 1 мл/мин.

Контрольный раствор вводят в хроматограф не менее 6 раз, измеряют значения выходного сигнала (площади пика и времени удерживания) и вычисляют их среднее арифметическое значение X .

Относительное среднее квадратичное отклонение выходного сигнала рассчитывают по формуле

у

где < - значение выходного сигнала (площади пика, времени удерживания).

Полученные значения относительного среднего квадратичного отклонения выходного сигнала (ст) хроматографа с соответствующим детектором при ручном и автоматическом дозировании пробы не должны превышать значений, приведенных в таблице 5.

• 6.3.2 Определение относительного изменения выходного сигнала за 8 часов непрерывной работы

Проводят операции, описанные в разделе 6.3.1. Через 8 часов непрерывной работы повторяют измерения.

Относительное изменение параметров выходного сигнала за 8 часов непрерывной работы хроматографа рассчитывают по формуле

Полученные значения относительного изменения выходного сигнала хроматографа с соответствующим детектором при ручном и автоматическом дозировании не должны превышать значений, приведенных в таблице 5.

Таблица 5

7 ОФОРМЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ПОВЕРКИ

• 7.1 Результаты поверки хроматографа заносят в протокол.

• 7.2 Положительные результаты поверки хроматографа оформляют выдачей свидетельства в соответствии с Порядком проведения поверки средств измерений, требования к знаку поверки и содержанию свидетельства о поверке (утв. приказом Минпромторга России № 1815 от 02.07.2015 г.).

• 7.3 На хроматограф, не удовлетворяющий требованиям настоящие методики поверки, выдают извещение о непригодности с указанием причин в соответствии с Порядком проведения поверки средств измерений, требования к знаку поверки и содержанию свидетельства о поверке (утв. приказом Минпромторга России № 1815 от 02.07.2015 г.).

Начальник отдела ФГУП "ВНИИМС", к.х.н.

Начальник сектора ФГУП "ВНИИМС", к.х.н.

Ш.Р. Фаткудинова

О.Л. Рутенберг

ПРИЛОЖЕНИЕ 1

МЕТОДИКА ПРИГОТОВЛЕНИЯ КОНТРОЛЬНЫХ РАСТВОРОВ

1 СРЕДСТВА ИЗМЕРЕНИЙ, ПОСУДА, РЕАКТИВЫ

• 1.1 Резерпин по ФС № 423267-96.

• 1.2 ГСО 7346-96 состава фенола, массовая концентрация фенола 1 г/дм³.

• 1.3 Кофеин безводный по ФС 42-0249-07

• 1.4 ГСО 8749-2006 состава раствора антрацена в ацетонитриле с аттестованным значением массовой концентрации 0,2 мг/см³, границы допускаемого значения относительной погрешности ±2 % (Р=0,95).

• 1.5 Колбы мерные наливные 2-100-2, 2-50-2, ГОСТ 1770-74.

• 1.6 Пипетки градуированные 6-2-1, 6-2-5, ГОСТ 29227-91(1).

• 1.7 Весы лабораторные по ГОСТ OIML R 76-1-2011 с пределом взвешивания 20 или 200 г.

• 1.8 Ацетонитрил для жидкостной хроматографии, LC-MS № 34967 по каталогу Fluka.

• 1.9 Дистиллированная вода по ГОСТ 6709-72 или LC-MS № 39253 по каталогу Fluka.

2 ПРОЦЕДУРА ПРИГОТОВЛЕНИЯ

• 2.1 Приготовление элюента «ЭР» для хроматографического разделения резерпина

В мерную колбу вместимостью 300 мл помещают 100 мл ацетонитрила и 100 мл воды. Перемешивают раствор.

• 2.2 Приготовление растворов резерпина в элюенте

• 2.2.1 Приготовление контрольного раствора «А»

Взвешивают 10 мг резерпина в бюксе.

Градуированной пипеткой добавляют в бюксу 2 мл элюента «ЭР», после чего сливают полученную смесь в мерную колбу вместимостью 100 мл. Повторяют данную операцию 2-3 раза для полного переноса контрольного вещества в колбу. Доводят объём раствора в колбе до метки элюентом «ЭР».

Массовая концентрация резерпина в растворе «А» составляет 100 мг/дм³.

• 2.2.2 Приготовление контрольного раствора «Б»

1 мл контрольного раствора «А» градуированной пипеткой помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят объём до метки элюентом «ЭР».

Массовая концентрация резерпина в растворе «Б» составляет 1 мг/дм³.

• 2.2.3 Приготовление контрольного раствора «В».

1 мл контрольного раствора «Б» градуированной пипеткой помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят объём до метки элюентом «ЭР».

Массовая концентрация резерпина в растворе «В» составляет 10 мкг/дм³.

• 2.2.4 Приготовление контрольного раствора «Г»

10 мл контрольного раствора «В» градуированной пипеткой помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят объём до метки элюентом «ЭР».

Массовая концентрация резерпина в растворе «Г» составляет 1 мкг/дм³.

• 2.2.5 Приготовление контрольного раствора «Д»

5 мл контрольного раствора «В» градуированной пипеткой помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят объём до метки элюентом «ЭР».

Массовая концентрация резерпина в растворе «Д» составляет 500 нг/дм³.

• 2.2.6 Приготовление контрольного раствора «Е»

1 мл контрольного раствора «В» градуированной пипеткой помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят объём до метки элюентом «ЭР».

Массовая концентрация резерпина в растворе «Е» составляет 100 нг/дм³.

• 2.2.7 Приготовление контрольного раствора «Ж»

5 мл контрольного раствора «Г» градуированной пипеткой помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят объём до метки элюентом «ЭР».

Массовая концентрация резерпина в растворе «Ж» составляет 50 нг/дм³.

• 2.2.8 Контрольные растворы «А» и «Б» могут храниться в закрытом сосуде при температуре 4 °C не более 30 дней; контрольные растворы «В», «Г» и «Д» не более 10 дней, контрольные растворы «Е» и «Ж» не подлежат хранению.

• 2.3 Приготовление растворов кофеина для определения ОСКО диодно-матричного детектора

• 2.3.1 Взвешивают в мерном стакане около 200 мг кофеина, добавляют в мерный стакан 25 мл дистиллированной воды, перемешивают. Полученный раствор переносят в мерную колбу вместимостью 100 см³. Ополаскивают мерный стакан дистиллированной водой, переносят ее в мерную колбу, доводят до метки дистиллированной водой, перемешивают.

Содержание кофеина в исходном растворе (С_о, мг/дм³) рассчитывают по формуле

_ т _ т

где т - масса кофеина, мг;

Е_|00 - вместимость мерной колбы, V = 100 см³.

• 2.3.2 Приготовление раствора кофеина с массовой концентрацией 10 мг/дм³

1 см³ исходного раствора кофеина переносят пипеткой вместимостью 1 см³ в мерную колбу вместимостью 200 см³. Доводят дистиллированной водой до метки, перемешивают.

• 2.3.3 Массовую концентрацию в мг/дм³ кофеина в растворе рассчитывают по формуле (1)

С -V

(1)

где V_n - вместимость пипетки, = 1 см³;

V - вместимость мерной колбы.

• 2.4 Приготовление раствора фенола для определения ОСКО диодно-матричного детектора и детектора с переменной длиной волны

1 см³ ГСО фенола в этаноле пипеткой вместимостью 1 см³ переносят в мерную колбу вместимостью 1000 см³ и доводят содержимое колбы до метки ацетонитрилом.

• 2.5 Приготовление элюентов «ЭФ» для хроматографического разделения фенола

В мерную колбу вместимостью 200 мл мерным цилиндром вместимостью 100 мл помещают 70 мл ацетонитрила, в ту же колбу пипеткой вместимостью 10 мл помещают 5 мл концентрированной фосфорной кислоты и доводят объем до метки дистиллированной водой.

• 2.6 Приготовление растворов антрацена

• 2.6.1 Приготовление контрольного раствора № 1 антрацена с массовой концентрацией 1 мг/дм³ в подвижной фазе.

0,5 см³ ГСО антрацена с массовой концентрацией 0,2 мг/ см³ пипеткой вместимостью 1 см³ переносят в мерную колбу вместимостью 100 см³ и доводят содержимое колбы до метки подвижной фазой (ацетонитрил : вода/4:1).

Массовая концентрация антрацена в растворе № 1 составляет 1 мг/дм ’.

• 2.6.2 Приготовление контрольного раствора № 2 антрацена с массовой концентрацией 0,1 мг/дм³ в подвижной фазе.

5 см³ раствора № 1 антрацена с массовой концентрацией 1 мг/дм³ переносят в мерную колбу вместимостью 50 см³ и доводят содержимое колбы до метки подвижной фазой (ацетонитрил : вода/4:1).

Массовая концентрация антрацена в растворе № 2 составляет 0,1 мг/дм³.