Методика поверки «ИНСТРУКЦИЯ. ХРОМАТОГРАФ ЖИДКОСТНЫЙ WATERS HPLC» (15311-96)

27-05-2021-12/39/34

Заместитель директора ФГУП ВНИИМС Руководитель ГЦИ СИ

ХРОМАТОГРАФ ЖИДКОСТНЫЙ WATERS HPLC

Методика поверки

i

Москва 2002 г.

Настоящая инструкция распространяется на жидкостные хроматографы Waters HPLC с детекторами : спектрофотометрическими (W490, W486), много волновыми на диодной матрице (W996, W2996, W2487), масс-спектрометрическим (MOD), флуори-метрическими (W474) многоволновым флуоресцентным (W2475), рефрактометрическими (W410, W2410, W2414), электрохимическим (W464), кондуктометрическим (W432) и устанавливает методику их первичной и периодических поверок.

Межповерочный интервал 1 год.

• 1. ОПЕРАЦИИ ПОВЕРКИ

  • 1.1. При проведении поверки должны выполняться операции, указанные в таблице 1.

Таблица 1.

• 2. СРЕДСТВ А ПОВЕРКИ

  • 2.1. При проведении поверки должны быть применены следующие средства поверки:

у       - аттестованные растворы антрацена в ацетонитриле с массовой концентрацией

антрацена 200 мкг/см³ (свидетельство о метрологической аттестации ВНИИМ им. Д.И.Менделеева № 2420);

• - кофеин-метанол-вода, массовая концентрация кофеина 10 мг/дм³;

• - кофеин-вода, массовая концентрация кофеина 1,0 мг/дм³;

• - контрольные растворы УЭП по ГОСТ 22171-90;

• - ГСО 7355-97 состава фенола;

• - металлическая линейка класса 1 по ГОСТ 427; .....................

• - потенциометр типа KCII4 кл.0,5.

Допускается применять другие средства поверки, метрологические характеристики которых соответствуют указанным выше.

• 2.2. При проведении поверки применяют следующие вспомогательные средства поверки:

• - колонка "NovaPak", 3,9x150 мм,

• - ацетонитрил для жидкостной хроматографии.

з

• 3. УСЛОВИЯ ПОВЕРКИ И ПОДГОТОВКА К НЕЙ

  • 3.1. При проведении поверки должны быть соблюдены следующие условия:

    - температура окружающего воздуха, °C - атмосферное давление, кПА - относительная влажность воздуха, % - напряжение переменного тока, В. - частота сети, Гц

    20 + 5 84- 106,7 30-90 220 + 22 50 ± 1

  • 3.2. Подготовительные работы следует выполнять в соответствии с инструкцией по эксплуатации хроматографа.

  • 3.3. Перед проведением поверки готовят контрольные смеси назначение и содержание анализируемых компонентов в которых приведены в таблице 2. Относительная погрешность аттестации не более 10%.

Таблица 2.

• 4. ПРОВЕДЕНИЕ ПОВЕРКИ

  • 4.1. Внешний осмотр

При внешнем осмотре должно быть установлено:

• - соответствие комплектности хроматографа паспортным данным;

• - четкость маркировки;

• - исправность механизмов и крепежных деталей.

• 4.2. Опробование

При опробовании проводят определение уровня флуктуационных шумов (отношение сигнал-шум для MCD), дрейфа нулевого сигнала и предела детектирования.

• 4.2.1. Уровень флуктуационных шумов (для МСД отношение сигнал-шум) и дрейф нулевого сигнала определяют при условиях, указанных в таблице 3.

Таблица 3.

’Значения коэффициента деления (чувствительности) при измерении дрейфа нулевого сигнала.

• 4.2.2. После выхода хроматографа на режим записывают в течение 1 часа нулевой сигнал на наиболее чувствительной шкале в координатах оптическая плотность (ток, напряжение) - время.

Уровень, флуктуационных шумов нулевого сигнала (Ах) принимают равным максимальному значению амплитуды повторяющихся колебаний нулеовго сигнала с периодом не более 20 с.

Значения дрейфа нулевого сигнала принимают равным смещению нулевого сигнала в течение 1 часа.

• 4.2.3. Значения уровня флуктуационных шумов нулевого сигнала не должны превышать значений, приведенных ниже:

- 1-Ю'^-5 е.о.п.

-1-10^ е.о.п.

W486

W490

W432

• 4.2.4. Значения дрейфа нулевого сигнала не должны превышать значений, приведенных ниже:

  W486

  W490

  ^v W996, W2996

  W2487

  W410, W2410

  • - 1-10 ⁴ е.о.п./ч

  • - 2,5-10“"* е.о.п./ч

  • - Ы0"³ е.о.п./ч

  V/2414

  W474

  W2475

  W432

  • - 1-10.....* е.о.п./ч

  -2,5-10~^7,ед.рефр./ч

  • - 1,0-10"⁷ ед.рефр./ч

  • - 500 мкв/ч

  -500 мкв/ч

  • - 0,05 мкСм/см-ч.

• 4.2.5. Отношение сигнал-шум (h/Ax) измеряют для масс-спектрометрического детектора при условиях, указанных в таблице 3.

В хроматограф вводят пробу контрольного вещества, измеряют высоту пика (h) в условных единицах или мм. Уровень флуктуационных шумов измеряют по п.4.2.2, в условных единицах или мм.

Значение (h/Ax) для MCD должно быть не менее -10:1.

• 4.2.6. Предел детектирования определяют с использованием контрольных веществ и условий, указанных в таблице 2.

В хроматограф водят пробу контрольного вещества, определяют высоту и ширину пика на половине его высоты_s)

Предел детектирования рассчитывают по формуле:

где G - масса вещества, г; Gp=C-V (С - массовая концентрация контрольного вещества, Х^гАм^л, V - объем дозы, дм³)

Q - скорость элюента, см7мин,

jU_{0 5}    - ширина пика на половине высоты, мин;

At ~ уровень флуктуационных шумов нулевого сигнала, определенный по п.4.2.2.;

Ах и Л - измеряют в мм, условных единицах либо в единицах, указанных в

п.42.3.

Полученные значения не должны превышать значений, приведенных ниже:

W486 - 1,04 (Г⁹ г/см³ антрацена;

-  W490 ~ 1,04 О”⁸ г/см³ антрацена;

4 W996, W2996 - 24 О"¹⁰ г/см³ антрацена;

W2487 - 1,04 О’”⁹ г/см³ антрацена;

W474 -2-10"¹² г/см³ антрацена;

W2475 - 140^-12 г/см³ антрацена;

W464 -5- 10“^п г/см³ фенола;

W4I0, 2410, 2414 - 14 О*⁴ г/см³ кофеина.

4.3. Определение метрологических характеристик

4.З.1.. Определение относительного среднего квадратического отклонения выходных сигналов.

Измерения проводят после выхода хроматографа на режим. Условия выполнения измерений должны соответствовать п.3.1.

• 4.3.2. Контрольную смесь (табл.2.) вводят в хроматограф не менее 10 раз, измеряют значения выходных сигналов (времени удерживания и площади пиков) вычисляют среднее арифметическое значение выходных сигналов (X).

• 4.3.3. Относительное среднее квадратическое отклонение выходных сигналов рассчитывают по формуле:

  

где: Xj - i-oe значение параметра выходного сигнала (площади пика, времени удерживания).

Значения, относительного среднего квадратического отклонения выходных сигналов не должны превышать норм, приведенных в таблице 4.

• 4.3.4. Определение относительного изменения выходных сигналов за.8 часов непрерывной работы.

7 Условия измерения аналогичны, описанным в п.3.1. Проводят операции по и.4.3.2. Через 8 часов непрерывной работы повторяют измерения по п.4.3.2.

Относительное изменение выходного сигнала за 8 часов непрерывной работы хроматографа рассчитывают но формуле:

X

• 4.3.5. Значения относительного изменения выходных сигналов не должны превышать норм, приведенных в таблице 4.

Таблица 4.

• 5. ОФОРМЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ПОВЕРКИ

  • 5.1. Результаты поверки хроматографа заносят в протокол.

  • 5.2. Положительные результаты поверки хроматографа оформляют выдачей свидетельства установленной формы.

  • 5.3. Хроматографы, не удовлетворяющие требованиям настоящих рекомендаций, к эксплуатации не допускаются. Хроматографы изымаются из обращения и после ремонта подвергаются повторной поверке.

Начальник сектора, к.х.н.

Подлежит публикации в открытой печати

Заместитель директора ФГУП ВНИИМС

Выпускаются по технической документации фирмы "Waters", США.

НАЗНАЧЕНИЕ И ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ

Хроматографы жидкостные Waters HPLC (далее - хроматографы) предназначены для измерения широкого спектра органических и неорганических веществ и может применяться для контроля качества пищевых продуктов, лекарственных препаратов, определения загрязнителей питьевых поверхностных и сточных вод, для анализа биологических объектов.

'ОПИСАНИЕ

Жидкостный хроматограф включает восемь детекторов, изократические и градиентные насосы, автосамплер и систему обработки данных.

Спектрофотометрический детектор Waters 490 (W490) предназначен для рутинных анализов веществ, имеющих поглощение в диапазоне 190-600 нм. Программирование длины волны в зависимости от времени удерживания компонентов позволяет .устанавливать для каждого из них. оптимальную по чувствительности детектора длину волны.

В дополнение к этим функциональным возможностям детектор Waters 486 (W486) позволяет проводить сканирование по диапазону длин волн при остановленном потоке и, соответственно, записывать спектры компонентов.

Многоволновые детекторы на диодной матрице Waters 996 (W996), Waters 2996 (W2996) выполняют анализ веществ на нескольких длинах волн одновременно. Регистрация анализируемого компонента одновременно на нескольких длинах волн дает' возможность судить о чистоте вещества. Двухволновой детектор на диодной матрице W2487 предназначен, в частности, для контроля чистоты веществ в режиме препаративной хроматографии.

.Масс-спектрометрический детектор (квадрупольный) часто устанавливают последовательно с детектором на диодной матрице для идентификации веществ, что особенно важно при контроле качества лекарственных препаратов, пищевых продуктов и других сложных природных и синтетических объектов.

В составе программного обеспечения - библиотека масс-спектров на 190000 веществ и 160000 структурных формул. Предусмотрен постоянный контроль всех существенных для проведения анализа режимных параметров.

Сканирующий флуоресцентный детектор Waters 474 (W474) обладает высокой чувствительностью, благодаря уникальной оптической системе. Применяемая в качестве источника энергии возбуждения ксеноновая лампа мощностью 150 Вт дает стабильный поток света высокой интенсивности. Детектор может комплектоваться кварцевой кюветой объемом 5 мкл или 16 мкл. Специальные фильтры дают возможность работать в видимой области диапазона длин волн. Встроенный микропроцессор обеспечивает установку и контроль режимных параметров детектора и проведение самодаагностики.

Флуоресцентный детектор широко применяется для анализа следовых количеств металлов, органических материалов, элементов в биологических объектах.

Многоволновой флуоресцентный детектор Waters 2475 (W2475) работает в широком диапазоне длин волн. Гибкое программное обеспечение позволяет проводить оптимизацию режимных параметров, обеспечивающих требуемую чувствительность для конкретной аналитической задачи.

Дифференциальные рефрактометрические детекторы Waters 410, Waters 2410, Waters 2414 обладают высокой чувствительностью и стабильностью показаний благодаря термостатированию оптический системы. Управление работой детекторов осуществляется контроллером.

Электрохимический детектор Waters 464 (W464) работает в трех режимах. В режиме постоянного тока он обладает высокой чувствительностью, в частности, для катехоламинов (на уровне пг) и таких ионов, как сульфид, цианид, йодид (на уровне ppb). В случае.....импульсного, детектирования позволяет анализировать углеводы на

уровне нанограммов. Режим сканирования потенциала рабочего электрода эффективен для исследования возможности электрохимического детектирования анализируемых веществ и выбора потенциала оптимального по чувствительности и влиянию неанализируемых компонентов. Электрохимический детекор W464 позволяет анализировать сложные объекты такие, как фармацевтические препараты, природные и сточные воды без предварите?аной пробоподготовки. Детектор имеет встроенный микропроцессор для установки и программирования режимных параметров и проведения диагностики.

Кондуктометрический детектор Waters 432 (W432) можно использовать для работы как в одноколоночном варианте, так и в двухколоночном (вторая колонка -подавляющая).

Оригинальная конструкция ячейки (пять электродов) существенно уменьшает уровень шума, обусловленного возникновением емкостного сопротивления, что повышает чувствительность детектора и дает возможность анализировать _?             неорганические ионы на уровне миллиардных долей. Благодаря наличию внутреннего

термостата снижен Дрейф базового сигнала. Малый объем ячейки (0,6 мкл) позволяет работать с микроколонками.                         .....

L

ОСНОВНЫЕ ТЕХНИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

Хроматографы жидкостные Waters HPLC с абсорбционными детекторами

Уровень флуктуационных шумов нулевого сигнала (сухая кювета, 254 нм, постоянная времени 1 с), е.о.п., не более

W486                                                      1-Ю'⁵

W490                                                      1-Ю'⁴

W996, W2996                                                   3-10’³

W2487                                                           1,0-10‘⁵

(одноволновой режим)

Дрейф нулевого сигнала (254 нм), е.о.п./ч, не более

W486                                        МО⁴

W490                                                            2,5-1 О'⁴

W996, W2996                                                   1-10'³

W2487                                                         1-10'⁴

Предел детектирования по антрацену (254 нм), г/мл, не более

W486                                                      1-Ю'⁹

W490                                                   1-Ю'⁸

W996, W2996                                             ....     2-10’⁹

W2487                                                            1-10'⁹

Диапазон длины волны, нм

W486, W490                                             190-600

W996, W2996....................... 190-800

W2487                                                 190-700

Погрешность установки длины волны, нм, не более:

W486, W490                .

W996, W2996, W2487

Случайная составляющая погрешности установки длины волны, нм, не более

W486

W490

W2487

Ширина полосы, нм, не более:

W486

W490

W2487

Относительная погрешность от нелинейности (при 254 нм),

%, не более:

W486 в диапазоне (0,1-1,5) е.о.п.

W490 в диапазоне (0,1-0,2) е.о.п.

W996, W2996 в диапазоне (0,1-2) е.о.п.

W2487 в диапазоне (0,1-2) е.о.п.

Габаритные размеры, мм:

W496                                                285x240x530

W490                                                240x290x530

W996, W2996                                         290x220x610

W2487                                               290x210x510

Масса, кг, не более

W486

W490

W996, W2996

W2487

Потребляемая мощность, Вт, не более

W486

W490

W996, W2996

W2487

Хроматографы жидкостные Waters HPLC с масс-спектрометрическим детектором

Диапазон масс, а.е.м.                                                    10-1000

Разрешающая способность, на уровне 10% от высоты пика во всем диапазоне масс, а.е.м.,..не.менее

Предел детектирования в режиме сканирования (190-200), а.е.м.

при m/z 194 по кофеину, г, не более                                       5-10'⁹

f

Хроматографы жидкостные Waters HPLC с флуориметрическими детекторами

Waters 474 Waters 2475

Диапазон длины волн, нм:

возбуждения-эмиссии                              200-700       200-900

Погрешность установки длины волны, нм, не более           ±2

Случайная составляющая погрешности установки длины волны, нм, не более                                ±0,3

Предел детектирования по антрацену, г/мл, не более          2-10'¹². ........1-Ю'¹²

Габаритные размеры, мм, не более                      300x150x460  285x210x505

Масса, кг, не более                                            19

Хроматографы жидкостные Waters HPLC с дифференциальными рефрактометрическими детекторами

WATERS 410, WATERS 2414

WATERS 2410

Диапазон коэффициента преломления, ед.рефр.                1,00-1,75

Верхний предел диапазона измерения,

отн.ед.рефр,:

Хроматографы жидкостные Waters HPLC с электрохимическим детектором W464

Хроматографы жидкостные Waters HPLC с кондуктометрическим детектором Waters 432

Насосы изократические (Waters 610, Waters 510, Waters 515, Waters 1515) и градиентные (Waters 626, Waters 616, Waters 600, Waters 1525) управляются контролерами, обеспечивающими стабильную подачу и программирование расхода элюента в диапазонах: 0,1 -9,9 мл/мин (Waters 510, Waters 515, Waters 626, Waters 616, Waters 1515, Waters 1525); 0,1-20 мл/мин (Waters 610, Waters 600). Максимальное рабочее давление: 27 МПа (Waters 626); 34МПа (Waters 616); 41 МПа (Waters 600, Waters 510, Waters 1515, Waters 1525).

Четырехкомпонентная градиентная система Waters 600E позволяет создавать до 11 градиентных профилей, относительная погрешность состава элюенга не более 0,5% (при расходе 1 мл/мин).

Хроматограф комплектуют автоматическим дозатором Waters 717 на 96 проб.

Обработка результатов анализа может проводиться с помощью интегратора (за исключением детектора W996 и масс-спектрометрического детектора), а также с применением персонального компьютера. В составе программного обеспечения "Миллениум" широкий набор методов обработки и графического представления хроматограмм, методов градуировки и статистической обработки данных.

ЗНАК УТВЕРЖДЕНИЯ ТИПА

Знак утверждения типа наносится на лицевую панель прибора и эксплуатационную документацию.

КОМПЛЕКТНОСТЬ

Комплектность поставки хроматографа жидкостного. Waters HPLC по технической документации фирмы "Waters", США, включающая:

• - детекторы

абсорбционные детекторы W486, W490, W996, W2996, W2487; масс-спектрометрический детектор;

флуориметрические детекторы W474,.W2475;.....................................

дифференциальные рефрактометрические детекторы W410, W2410, W2414; электрохимический детектор W464;

кондуктометрический детектор W432;

• - насосы                    <

изократические W610, W510, W515, W1515; градиентные W626, W616, W600, W1525 .

• - дозатор W717;

• - градиентная система Waters 600Е;

-колонка;

• - комплект ЗИП.

Эксплуатационная документация.

Инструкция по поверке.

ПОВЕРКА

Поверку прибора производят в соответствии с инструкцией по поверке "Инструкция. Хроматографы жидкостные Waters HPLC. Методика поверки", разработанной и утвержденной ВНИИМС в 2002 году и входящей в комплект технической документации.

При поверке применяют аттестованные смеси, относительная погрешность аттестации не более 10%:

• - аттестованные растворы антрацена в ацетонитриле с массовой концентрацией антрацена 200 мкг/см³ (свидетельство о метрологической аттестации ВНИИМ им.Д.И.Менделеева № 2420);

• - кофеин-метанол-вода, массовая концентрация кофеина 20 мг/дм³;

• - изопропиловый спирт-метанол, массовая концентрация изопропилового спирта 10 мг/дм³;

• - контрольные растворы УЭП по ГОСТ 22171-90;

ацетаминофенон-буферный раствор-метанол, массовая концентрация ацетаминофенона 10 мг/дм³.

Межповерочный интервал - 1 год. .

НОРМАТИВНЫЕ ДОКУМЕНТЫ

Техническая документация фирмы "Waters”, США.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Хроматографы жидкостные Waters HPLC соответствуют требованиям технической документации фирмы "Waters", США.

ИЗГОТОВИТЕЛЬ: - фирма "Waters", США.

34 Maple Street, Milford, Massachusetts 01757-3696 USA

Начальник сектора