Инструкция «Хроматографы жидкостные "Chromaster"» (МП 51035-12 с изменением №1)

УТВЕРЖДАЮ

с-»О£>*

‘'.'ГЬ-УЭ.

Заместитель директора по водственной метрологии ФГУП «ВНИИМС»

Иванникова ________2019 г.

ИНСТРУКЦИЯ

Хроматографы жидкостные «Chromaster»

Методика поверки

МП 51035-12

с изменением № 1

Москва 2019 г.

Настоящая методика распространяется на хроматографы жидкостные «Chromaster» (далее - хроматографы) фирмы «Hitachi High-Tech Science Corporation», Япония, и устанавливает методику их первичной и периодической поверки.

Методика распространяется на хроматографы базовой модели (Chromaster) со спектрофотометрическими детекторами 5410 UV, 5420 UV/VIS, детектором на диодной матрице 5430 Diode Array, флуориметрическим детектором 5440 FL, рефрактометрическим детектором 5450 RI, детектором низкотемпературного испарительного светорассеяния VWR ELSD 90 LT или SEDEX LT-ELSD 100 или масс-спектрометрическим 5610 MS и модели Chromaster ULTRA RS со спектрофотометрическим детектором 6420 UV/VIS, детектором на диодной матрице 6430 Diode Array и/или флуориметрическим детектором 6440 FL

Интервал между поверками - 1 год.

Изменение № 1

• 1 ОПЕРАЦИИ ПОВЕРКИ

  • 1.1 При проведении поверки выполняют операции, указанные в таблице 1.

    При наличии в комплекте хроматографа нескольких детекторов допускается проведение поверки для части из них (на основании заявления владельца СИ или другого лица, представляющего СИ на поверку) в соответствии с п. 16 «Порядок проведения поверки средств измерений, требования к знаку поверки и содержанию свидетельства о поверке» (утв. приказом Министерства промышленности и торговли РФ от 2 июля 2015 г. № 1815).

    • 1.3 Если при проведении той или иной операции поверки получен отрицательный результат, дальнейшее выполнение поверки прекращают.

    • 1.4 При проведении периодической поверки хроматографов, эксплуатируемых по НД на методики измерений, отвечающим требованиям ГОСТ Р 8.563-2009, проверяют показатели точности результатов измерений в соответствии с процедурами и нормативами контроля, регламентированными в НД на методику измерений.

    Изменение № 1

Таблица 1

1.2 Поверку хроматографов выполняют для детектора (детекторов), входящих в комплект поставки хроматографа.

• 2 СРЕДСТВА ПОВЕРКИ

  • 2.1 При проведении поверки применяют следующие средства:

- ГСО 8749-2006 состава антрацена в ацетонитриле с массовой концентрацией антрацена 200 мг/дм³;

• - весы электронные лабораторные неавтоматического действия X (per. № 60903-15), НПВ не более 220 г, I (специального) класса точности по ГОСТ OIML R 76-1-2011.

• - колбы мерные 2-50-2, 2-100-2, ГОСТ 1770-74;

• - цилиндры мерные 2-500-2, ГОСТ 1770-74;

• - пипетки градуированные 1-2-2-1, 1-2-2-2, 1-2-2-5, ГОСТ 29227-91.

• - D-глюкоза квалификации «ч.д.а.» по ГОСТ 6038-79;

• - резерпин по фармакопейной статье ФС 423267-96;

• - ацетон для ВЭЖХ, № С AS № 67-64-1, массовая доля основного вещества не менее 99,9 %, (кат. № 270725 Sigma-Aldrich).

• - метанол для HPLC, CAS № 67-56-1, массовая доля основного вещества не менее 99,9 % (кат № 34860 Sigma-Aldrich).

• - ацетонитрил для ВЭЖХ, ТУ 6-09-14-2167-84;

• - вода дистиллированная, ГОСТ 6709-72;

• - деионизованная вода с удельным сопротивлением не менее 18 МОм/см, ТОС менее 50 мкг/дм³, ГОСТ Р 52501-2005;

• - стаканы или бюксы для взвешивания.

• - колонки хроматографические обращеннофазные С18 размером 150><4,6 мм, заполненные:

сферическим силикагелем с эффективным диаметром частиц 5 мкм, эффективным диаметром пор (80-100) А и химически модифицированной поверхностью октаде-цильными группами - для базовой модели;

сферическим силикагелем с непористым ядром («Core-Shell») эффективным диаметром частиц 2,7 мкм, эффективным диаметром пор (80-100) А и химически модифицированной поверхностью октадецильными группами - для модели Chromaster ULTRA RS.

Допускается применение аналогичных средств поверки, обеспечивающих определение метрологических характеристик поверяемых СИ с требуемой точностью, в том числе, чистых реактивов (например, D-глюкоза безводная, CAS № 50-99-7, с содержанием основного компонента не менее 98 % (кат. № G8270 Sigma-Aldrich) и резерпин CAS № 50-55-5, массовая доля основного вещества не менее 97,0 %, (кат № 83580 Sigma-Aldrich) или других с содержанием основного вещества не ниже указанного) и растворителей других производителей с другими каталожными номерами, аналогичные по содержанию основного вещества и по назначению (для ВЭЖХ).

Изменение № 1

• 3 УСЛОВИЯ ПОВЕРКИ И ПОДГОТОВКА К НЕЙ, ПРАВИЛА БЕЗОПАСНОСТИ ПРИ ВЫПОЛНЕНИИ ПОВЕРКИ.

  • 3.1 При проведении поверки соблюдают следующие условия:

    • - температура окружающего воздуха, °C                      20±5

    • - атмосферное давление, кПа                              от 84 до 106,7

    • - относительная влажность воздуха, %                      от 30 до 90

    • - напряжение в сети переменного тока, В                     220±22;

    • - частота переменного тока в сети, Гц                          50± 1

    • 3.1.1 При выполнении измерений соблюдают правила техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования электробезопасности при работе с электроустановками.

    • 3.1.2 Помещение должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией и соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать допустимых значений по ГОСТ 12.1.005-88.

    • 3.1.3 Поверку выполняет сотрудник юридического лица, аккредитованного на поверку жидкостных хроматографов, аттестованный в качестве поверителя, прошедший инструктаж по технике безопасности, и ознакомленный с документацией на поверяемое СИ.

    • 3.1.4 К приготовлению растворов и выполнению операций с хроматографом допускают операторов или лаборантов, обслуживающих хроматограф, (под наблюдением поверителя) - лиц не моложе 18 лет, имеющих высшее или среднетехническое образование, имеющих опыт проведения химико-лабораторных работ, прошедших инструктаж по технике безопасности.

Изменение № 1

• 3.2 Подготовительные работы выполняют в соответствии с Руководством по эксплуатации хроматографа.

• 3.3 Перед проведением поверки готовят контрольные растворы, назначение и содержание анализируемых компонентов в которых приведены в таблице 2.

Таблица 2 - Контрольные растворы, применяемые при поверке

Продолжение таблицы 2

Методика приготовления контрольных растворов приведена в приложении А.

Изменение № 1

• 4 ПРОВЕДЕНИЕ ПОВЕРКИ

  • 4.1 Внешний осмотр

При внешнем осмотре устанавливают

• - соответствие комплектности хроматографа паспортным данным;

• - четкость маркировки;

• - исправность механизмов и крепежных деталей.

• 4.2 Опробование

При опробовании проводят определение уровня флуктуационных шумов, дрейфа нулевого сигнала и предела детектирования или чувствительности (отношения сиг-нал/шум) для детектора 5610 MS.

Изменение № 1

• 4.2.1 Уровень флуктуационных шумов и дрейф нулевого сигнала определяют при условиях, указанных в таблице 3.

• 4.2.2 После выхода хроматографа на режим фиксируют в течение 1 часа нулевой сигнал каждого детектора на шкале с максимальной чувствительностью в координатах сигнал (оптическая плотность, напряжение) - время.

Уровень флуктуационных шумов нулевого сигнала (Ах) принимают равным максимальному значению амплитуды (И) повторяющихся колебаний нулевого сигнала с периодом не более 20 с.

Значение дрейфа нулевого сигнала принимают равным смещению нулевого сигнала в течение 1 часа.

Таблица 3 - Условия хроматографирования

Изменение № 1

• 4.2.3 Значения уровня флуктуационных шумов нулевого сигнала и дрейфа нулевого сигнала не должны превышать значений, указанных в таблице 4.

Таблица 4 - Значения уровня флуктуационных шумов нулевого сигнала и дрейфа нуле-вого сигнала детекторов

Изменение № 1

• 4.2.4. Определение предела детектирования

Определение предела детектирования выполняют с использованием контрольных растворов и условий, указанных в таблице 2. В хроматограф вводят пробу контрольного раствора, измеряют высоту и ширину пика на половине его высоты (Д_{о 5}). Предел детектирования рассчитывают по формуле

2-Ax-G _ 2 • Ах-G

⁼ Л-//₀₅-К" S-V ’

где G - масса вещества, г; G = С • v (С - массовая концентрация контрольного вещества, мг/дм³, v - объем пробы, дм³);

V - скорость потока элюента, см³/мин;

/4q ₅ - ширина пика на половине высоты, мин;

Ах - уровень флуктуационных шумов нулевого сигнала, определенный по п.4.2.2;

Ах и h - измеряют в мм, условных единицах либо в единицах, указанных в п.4.2.3;

S - Площадь пика в единицах измерений площади пика в соответствии с детектором (при обработке хроматограмм с помощью ПО).

Изменение № 1

Полученные результаты не должны превышать приведенных ниже значений предела детектирования (таблица 5):

Таблица 5 - Значения пределов детектирования

Изменение № 1

• 4.2.5 Определение чувствительности (отношения синал/шум) детекторов массс-спектрометрических 5610 MS выполняют в соответствии с п. 4.1.3 Приложения к РЭ на хроматограф «Cromaster» базовой модели - инструкции к масс-спектрометрическому детектору 5610 MS:

• 4.2.5.1 Заполняют газонепроницаемый шприц контрольным раствором КР 6 и вводят его со скоростью 2 мм²/мин в детектор с помощью шприцевого насоса.

Получают хроматограмму в режиме SIM (отслеживание отдельного иона) в сле

дующих условиях:

Режим измерения Полярность Время сбора, мин AIF

Целевой ион (zn/z) Начало, мин Окончание, мин Фремя задержки, мс AIF / Разделение:

Напряжение регулируется на основании заданных условий проверки чувствительности при установке прибора.

• 4.2.5.2 Обрабатывают полученные данные за 0,2 минуты. Рассчитывают среднюю интенсивность сигнала SIM-спектра образца.

• 4.2.5.3 Заполняют газонепроницаемый шприц метанолом и вводят со скоростью 2 мкл / мин в детектор с помощью шприцевого насоса.

• 4.2.5.4 Хроматограмму в режиме SIM снимают в тех же условиях, как описано выше. Повторяют до полного удаления следов контрольного вещества и стабилизации выходного сигнала.

• 4.2.5.5 Выполняют операции по п.п. 4.2.5.1 - 4.2.5.2. Рассчитывают среднюю интенсивность сигнала SIM-спектра чистого метанола.

• 4.2.5.6 Чувствительность (соотношение сигнал/шум, S / N) рассчитывают по формуле:.

  

где A_r - среднее значение интенсивности сигнала при измерении контрольного раствора, ед. счета,

А_о - среднее значение интенсивности сигнала при измерении чистого метанола, ед. счета.

Полученное значение чувствительности S/N должно быть не менее 100.

Изменение № 1

4.3 Определение метрологических характеристик

• 4.3.1 Определение относительного среднего квадратичного отклонения выходных сигналов.

Измерения проводят после выхода хроматографа на режим. Условия выполнения измерений должны соответствовать п.3.1.

• 4.3.2 Контрольный раствор (табл.2) вводят в хроматограф не менее 10 раз, измеряют значения выходных сигналов (времени удерживания, высоты и площади пика), вычисляют среднее арифметическое значение выходных сигналов (X).

• 4.3.3 Относительное среднее квадратическое отклонение выходных сигналов рассчитывают по формуле

₁₀₀ ^S'T1 „-1  •

где Xj - i-тое значение параметра выходного сигнала (площади пика, высоты пика и времени удерживания).

Значения относительного среднего квадратичного отклонения выходного сигнала не должны превышать значений, приведенных в таблице 5.

• 4.3.4 Определение относительного изменения выходного сигнала за 8 часов непрерывной работы.

Условия проведения измерений описаны в п. 3.1. Проводят операции по п.4.3.2. Через 8 часов непрерывной работы хроматографа повторяют измерения по п. 4.3.2. Относительное изменение выходного сигнала за 8 часов непрерывной работы хроматографа рассчитывают по формуле:

_а,=Щ.100,

¹ X

где X - среднее значение параметра выходного сигнала (площади пика) в серии экспериментов.

• 4.3.5 Значения относительного изменения выходного сигнала не должны превышать норм, приведенных в таблице 6.

Таблица 6 - Метрологические характеристики

Изменение № 1

5. ОФОРМЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ПОВЕРКИ

5.1. Результаты поверки хроматографов заносят в протокол.

• 5.2 Положительные результаты поверки анализатора оформляют выдачей Свидетельства о поверке в соответствии с Порядком проведения поверки средств измерений, требования к знаку поверки и содержанию свидетельства о поверке (утв. приказом Министерства промышленности и торговли РФ от 2 июля 2015 г. № 1815) с указанием поверенного детектора (детекторов).

В соответствии с п. 16 вышеуказанного Порядка при проведении поверки хроматографов жидкостных «Chromaster» в свидетельстве указывают объем поверки (перечень поверенных детекторов).

Знак поверки наносят в свидетельство о поверке.

• 5.3 На хроматографы, не удовлетворяющие требованиям настоящей методики, выдают извещение о непригодности с указанием причин в соответствии с Порядком проведения поверки средств измерений, требования к знаку поверки и содержанию свидетельства о поверке (утв. приказом Министерства промышленности и торговли РФ от 2 июля 2015 г. № 1815).

• 5.4. После ремонта хроматографы подвергают поверке.

Изменение № 1

Начальник отдела ФГУП «ВНИИМС»

Старший научный сотрудник ФГУП «ВНИИМС»

ПРИЛОЖЕНИЕ А

МЕТОДИКА ПРИГОТОВЛЕНИЯ КОНТРОЛЬНЫХ РАСТВОРОВ

Методика предназначена для приготовления контрольных растворов для поверки хроматографов жидкостных «Chromaster».

1 СРЕДСТВА ИЗМЕРЕНИЙ, ПОСУДА, РЕАКТИВЫ

• 1.1 ГСО 8749-2006 состава антрацена в ацетонитриле, массовая концентрация антрацена 0,200 мг/см³.

• 1.2 Весы электронные лабораторные неавтоматического действия X (per. № 60903-15), НПВ не более 220 г, I (специального) класса точности по ГОСТ OIML R 76-1-2011.

• 1.3 Колбы мерные 2-50-2, 2-100-2, ГОСТ 1770-74.

• 1.4 Цилиндры мерные 2-500-2, 2-1000-2, ГОСТ 1770-74.

• 1.5 Пипетки, градуированные 1-2-2-1, 1-2-2-2, 1-2-2-5, ГОСТ 29227-91.

• 1.6 D-глюкоза квалификации «ч.д.а.» по ГОСТ 6038-79 или чистый реактив D-глюкозы безводной, CAS № 50-99-7, массовая доля основного вещества не менее 99,5 %, (кат. № G8270 Sigma-Aldrich).

• 1.7 Чистый реактив резерпин по фармакопейной статье ФС 423267-96 или чистое вещество CAS № 50-55-5, массовая доля основного вещества не менее 97,0 %, (кат № 83580 Sigma-Aldrich);

• 1.8 Ацетон для ВЭЖХ, № CAS № 1, массовая доля основного вещества не менее 99,9 %, (кат. № 270725 Sigma-Aldrich).

• 1.9 Метанол для HPLC, С AS № 67-56-1, массовая доля основного вещества не менее 99,9 % (кат № 34860 Sigma-Aldrich).

• 1.10 Ацетонитрил для ВЭЖХ, ТУ 6-09-14-2167-84;

• 1.11 Вода дистиллированная, ГОСТ 6709-72;

• 1.12 Деионизованная вода с удельным сопротивлением не менее 18 МОм/см, ТОС менее 50 мкг/дм³, ГОСТ Р 52501-2005;

• 1.13 Стаканы или бюксы для взвешивания.

• 1.14 Стаканы, банки для элюента.

Примечание - допускается применение чистых веществ и растворителей других производителей с другими каталожными номерами, аналогичные по содержанию основного вещества и по назначению (для ВЭЖХ).

2 ПРОЦЕДУРА ПРИГОТОВЛЕНИЯ

• 2.1 Приготовление раствора элюента ацетонитрил : вода с объемным отношением 84 : 16. В стакан или банку вместимостью 1 дм³ с помощью цилиндра наливают 160 см³ деинизованной воды, добавляют 840 см³ ацетонитрила, перемешивают, переливают в банку для хранения элюента.

• 2.2 Приготовление контрольных растворов антрацена

• 2.2.1 Приготовление контрольного раствора № 1 с массовой концентрацией антрацена 1,0 мг/даГ.

0,5 см³ ГСО состава антрацена в ацетонитриле с массовой концентрацией 200 мг/дм³ градуированной пипеткой помещают в мерную колбу вместимостью 100 см³ и доводят объем до метки раствором подвижной фазы (ацетонитрил-вода с объемным отношением 84:16). Контрольный раствор используют для определения предела детектирования и метрологических характеристик спектрофотометрических детекторов 5410 UV, 5420 UV/VIS, 6420 UV/VIS, детекторов на диодной матрице 5430 Diode Array, 6430 Diode Array

• 2.2.2 Приготовление контрольного раствора № 2 с массовой концентрацией антрацена 0,1 мг/дм³.

5 см³ раствора № 1 с массовой концентрацией 1,0 мг/дм³ градуированной пипеткой помещают в мерную колбу вместимостью 50 см³ и доводят объем до метки раствором подвижной фазы (ацетонитрил-вода с объемным отношением 84:16).

Контрольный раствор используют для определения предела детектирования и метрологических характеристик флуориметрического детектора 5440 FL.

• 2.2.3 Приготовление контрольного раствора № 3 с массовой концентрацией антрацена 0,002 мг/дм³.1 см³ раствора № 2 с массовой концентрацией 0,1 мг/дм³ градуированной пипеткой помещают в мерную колбу вместимостью 50 см³ и доводят объе.м до метки раствором подвижной фазы (ацетонитрил-вода с объемным отношением 84:16). Контрольный раствор используют для определения предела детектирования и метрологических характеристик флуориметрического детектора 6440 FL.

• 2.3 Приготовление контрольного раствора глюкозы.

• 2.3.1 Приготовление контрольного раствора № 4 с массовой концентрацией глюкозы 1000 мг/дм³. Взвешивают в стакане (100±1) мг глюкозы, затем количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 см³, многократно омывая стакан деионизованной водой, доводят раствор в колбе до метки деионизованной водой, перемешивают. Контрольный раствор используют для определения предела детектирования и метрологических характеристик низкотемпературного испарительного светорассеяния VWR ELSD 90 LT или SEDEX LT-ELSD 100. *

• 2.4 Приготовление контрольных растворов резерпина

• 2.4.1 Приготовление рабочего раствора резерпина с массовой концентрацией 1000 мг/дм³ в ацетоне. Взвешивают в стакане (100±1) мг резерпина, затем количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 см³, многократно омывая стакан ацетоном, доводят раствор в колбе до метки ацетоном, перемешивают до полного растворения.

• 2.4.2 Приготовление контрольного раствора резерпина КР 5 с массовой концентрацией 10 мг/дм³ в метаноле. 1 см³ рабочего раствора по 4.3.1 с массовой концентрацией 1000 мг/дм³ градуированной пипеткой помещают в мерную колбу вместимостью 100 см³ и доводят объем до метки раствором метанолом, перемешивают. Контрольный раствор используют для определения метрологических характеристик масс-спектрометрического детектора 5610 MS.

• 2.4.3 Приготовление контрольного раствора резерпина КР 6 с массовой концентрацией 0,15 мг/дм³ в метаноле.

• 1.5 см³ контрольного раствора КР 4 по 4.3.2 с массовой концентрацией 10 мг/дм³ градуированной пипеткой помещают в мерную колбу вместимостью 100 см³ и доводят объем до метки раствором метанолом, перемешивают.

Контрольный раствор используют для определения чувствительности (отношения сигнал/шум) масс-спектрометрического детектора 5610 MS.

• 2.5 Контрольные растворы используют сразу после приготовления, не хранят.

Изменение № 1