Методика поверки «Хроматографы жидкостные LC-30 NEXERA» (МП 47443-11)

УТВЕРЖДАЮ

ИНСТРУКЦИЯ

ХРОМАТОГРАФЫ ЖИДКОСТНЫЕ

LC-30 NEXERA

Методика поверки

Москва 2011 г.

Настоящая методика распространяется на хроматографы жидкостные LC-30 NEXERA фирмы "SHIMADZU", Япония, фирмы "SHIMADZU U.S.A. MANUFACTURING, INC ", США (далее - хроматографы) и устанавливает методику их первичной и периодической поверок.

Межповерочный интервал - 1 год.

1 ОПЕРАЦИИ ПОВЕРКИ

1.1 При проведении поверки выполняют операции, указанные в таблице 1. Таблица 1                                      

2 СРЕДСТВА ПОВЕРКИ

• 2.1 При проведении поверки применяют следующие средства поверки:

• - ГСО 8749-2006 состава антрацена в ацетонитриле, массовая концентрация антрацена 0,200 мг/см³;

• - кофеин фармакопейный; ФС 42-0248-07, содержание основного вещества не менее 98%;

• - папаверин гидрохлорид, ГФ-11 (фармакопейная статья);

• - п-нитрофенол ТУ 6-09-3973-75.или CAS 100-02-7;

• 2.2 При проведении поверки применяют следующие вспомогательные средства поверки:

• - ацетонитрил для жидкостной хроматографии, ТУ 6-09-14-2167-84;

• - вода для лабораторного анализа (бидистиллированная или деионизованная), ГОСТ Р 52501-2005;

• - метанол ГОСТ 6995-75

• - ацетатный буфер, pH = 5;

• - азот газообразный очищенный, ГОСТ 9293-74, высший сорт;

• - колонка для высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), применимая для варианта обращенофазовой или нормальнофазовой ВЭЖХ, например, Pathfinder AS column (50 х 4,6 мм, средний размер частиц 2,5 мкм), Shim-pack VP-ODS (150 х 4,6 мм, средний размер частиц 5 мкм);

• - термометр типа ТЛ4 № 2 по ГОСТ 215-73;

• - психрометр типа ПГ-1БМ по ГОСТ 6353-85;

• - барометр-анероид БАММ-1 по ТУ 25-04-1618-72.

Допускается применять другие средства поверки, технические и метрологические характеристики которых соответствуют указанным выше.

• 3 УСЛОВИЯ ПОВЕРКИ И ПОДГОТОВКА К НЕЙ

  • 3.1 При проведении поверки соблюдают следующие условия, указанные в табли

це 2: Таблица 2.

• 3.2 Подготовительные работы выполняют в соответствии с руководством по эксплуатации хроматографа.

• 3.3 Перед проведением поверки готовят контрольные растворы (методика приготовление контрольных растворов дана в приложении А).

• 4 ПРОВЕДЕНИЕ ПОВЕРКИ

  • 4.1 Внешний осмотр

При внешнем осмотре устанавливают:

• - соответствие комплектности хроматографа паспортным данным;

• - четкость маркировки;

• - исправность механизмов и крепежных деталей.

Не допускаются дефекты, которые могут повлиять на работоспособность прибора.

• 4.2 Опробование

При опробовании определяют уровень флуктуационных шумов, дрейф нулевого сигнала и предел детектирования (отношение сигнал/шум для МСД). При определении уровня флуктуационных шумов и дрейфа нулевого сигнала хроматографическую колонку заменяют на стальной или полиэтиленовый капилляр (сталь марки 316 или материал РЕЕК) длиной (30 - 50) см и внутренним диаметром (0,1 - 0,3) мм.

4.2.1 Уровень флуктуационных шумов и дрейф нулевого сигнала детектора определяют при условиях, указанных в таблице 2. После выхода хроматографа на режим записывают в течение 30 мин нулевой сигнал каждого детектора на наиболее чувствительной шкале прибора.

Таблица 2

Уровень флуктуационных шумов нулевого сигнала (Ах) принимают равным амплитуде h повторяющихся колебаний нулевого сигнала с периодом не более 20 с. Программное обеспечение "LC solution" позволяет получать значение уровня флуктуационных шумов с помощью функции "Параметры проверки базовой линии". Уровень флуктуационных шумов определяют в микровольтах с дальнейшим пересчетом в единицы физических величин, приведенные в Приложении Б.

• 4.2.2 Определение предела детектирования, отношения сигнал/шум и метрологических характеристик выполняют на хроматографе, укомплектованном соответствующим детектором и аналитической колонкой.

Отношение сигнал-шум измеряют для масс-спектрометрического детектора при условиях, указанных в таблицах 2 и 3. В хроматограф вводят пробу контрольного вещества. Находят значение отношения сигнал/шум (S/N) для пика со значением m/z по таблице 2, используя встроенный в программу обработки данных калькулятор (S/N Check).

Значения S/N должны быть не менее указанных в приложении Б для первичной поверки и указанных в приложении В для поверки в условиях эксплуатации.

• 4.2.3 Предел детектирования оценивают с использованием контрольных растворов и условий, указанных в таблице 3.

В хроматограф вводят пробу контрольного раствора и определяют высоту или площадь пика (S).

Предел детектирования в г/см³ рассчитывают по формулам

_ 2 • Ах • G       „   _ 2 • Ах • G ■ 60

(-'мин ~ и          ИЛИ С_мин —     << ту

где V - скорость элюента, см3/мин;

ц_{0 5}     - ширина пика на половине высоты, мин;

Ах - уровень флуктуационных шумов нулевого сигнала, определенный до ввода контрольного вещества;

Н - высота пика контрольного вещества;

Ах и Н - измеряют в мм, условных единицах, мкВ, либо в единицах, указанных в Приложениях Б и В.

S      - площадь пика контрольного вещества, мкВ-c, мм-с, условных единицах с,

либо в единицах, указанных в Приложениях Б и В, умноженных на секунду;

G - количество контрольного вещества, г;

G = C-V_dO3,

где С - массовая концентрация контрольного вещества, мг/дм³;

F_dO3 - объем введенной пробы контрольного вещества, мкл.

Результаты определения признают положительными, если полученные значения предела детектирования не превышают значений для первичной поверки и для поверки в условиях эксплуатации, указанных в приложении Б.

Таблица 3

• 4.3 Определение относительного среднего квадратического отклонения (СКО) выходного сигнала

• 4.3.1 Контрольный раствор (табл. 3.) вводят в хроматограф не менее 6 раз, измеряют значения выходных сигналов (времени удерживания и площади пиков) и вычисляют среднее арифметическое значение выходных сигналов ( X ).

• 4.3.2 Относительное среднее квадратическое отклонение выходного сигнала рассчитывают по формуле

  

где X, - i-oe значение параметра выходного сигнала (площади пика, времени удержи

вания).

Значения относительного среднего квадратического отклонения выходных сигналов не должны превышать значений для первичной поверки и для поверки в условиях эксплуатации, указанных в приложении В.

• 4.4 Определение относительного изменения выходного сигнала за 8 часов непрерывной работы.

• 4.4.1 Условия измерения аналогичны, описанным в разделе 3. Проводят операции, описанные в п.4.3.1. Через 8 часов непрерывной работы повторяют измерения по п.4.3.1.

• 4.4.2 Относительное изменение выходного сигнала за 8 часов непрерывной работы хроматографа рассчитывают по формуле

X; - X

<?='■......- _ 1-100

X

Значения относительного изменения выходного сигнала не должно превышать значений, приведенных в приложении В.

5. ОФОРМЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ПОВЕРКИ

• 5.1. Результаты поверки хроматографов заносят в протокол.

• 5.2. Положительные результаты поверки хроматографов оформляют выдачей свидетельства в соответствии с ПР 50.2.006.

• 5.3. Хроматографы, не удовлетворяющие требованиям настоящих рекомендаций, к эксплуатации не допускаются. Хроматограф изымается из обращения. Свидетельство о поверке изымают и выдают извещение о непригодности с указанием причин в соответствии с ПР 50.2.006.

• 5.4. После ремонта хроматограф подвергают поверке.

Начальник отдела ФГУП "ВНИИМС"

Начальник сектора ФГУП "ВНИИМС"

ПРИЛОЖЕНИЕ А

МЕТОДИКА ПРИГОТОВЛЕНИЯ КОНТРОЛЬНЫХ РАСТВОРОВ

Методика предназначена для приготовления контрольных растворов антрацена, папаверина, п-нитрофенола, кофеина.

• 1 СРЕДСТВА ИЗМЕРЕНИЙ, ПОСУДА, РЕАКТИВЫ

  • 1.1 ГСО 8749-2006 состава антрацена в ацетонитриле, массовая концентрация антрацена 0,200 мг/см³.

• 1.5 Кофеин фармакопейный; ФС 42-0248-07, содержание основного вещества не менее 98 %.

• 1.6 Папаверин гидрохлорид, ГФ-11 (фармакопейная статья).

• 1.7 п-нитрофенол по ТУ 6-09-3973-75 или CAS 100-02-7.

• 1.8 Весы лабораторные по ГОСТ Р 53228-2008, с верхним пределом взвешивания 200 г.

• 1.9 Мера массы (гири), 2-01 класс точности, ГОСТ 7328-2001.

• 1.10 Колбы мерные наливные 2-100-2, , 2-500-2, 2-1000-2, 2-2000-2по ГОСТ 1770-74.

• 1.11 Пипетки градуированные 1-1-2-1 поГОСТ 29227-91(1).

• 1.12 Стаканы В-1-50ТС по ГОСТ 25336-82.

• 1.13 Вода для лабораторного анализа (бидистиллированная), ГОСТ Р 52501-2005.

• 1.14 Дистиллированная вода по ГОСТ 6709-72.

• 2 ПРОЦЕДУРА ПРИГОТОВЛЕНИЯ

  • 2.1 Приготовление исходного раствора папаверина с массовой концентрацией 10 мг/ дм³

    • 2.1.1 Взвешивают в стакане 20,0 мг папаверина, добавляют в стакан 25 см³ воды, перемешивают. Полученный раствор переносят в мерную колбу вместимостью 2000 см³. Ополаскивают стакан водой, раствор переносят в мерную колбу, доводят до метки водой, перемешивают.

    • 2.1.2 Приготовление контрольного раствора папаверина

1 см³ раствора, приготовленного по п.2.1.1, переносят в мерную колбу вместимостью 1000 см³ и доводят до метки водой.

Массовая концентрация полученного раствора 0,01 мг/дм³.

Погрешность приготовления контрольного раствора ± 4,9 %.

2.2. Приготовление растворов п-нитрофенола

• 2.2.1 Приготовление исходного раствора п-нигрофенола

Навеску п-нитрофенола 20,0 мг переносят в мерную колбу вместимостью 1000 см³, объём колбы доводят до метки элюентом (табл.2).

Массовая концентрация п-нитрофенола 20 мг/ дм³.

• 2.2.2 Приготовление контрольного раствора п-нитрофенола

1 см³ раствора, приготовленного по п.2.2.1, переносят в мерную колбу вместимостью 1000 см³ и доводят до метки элюентом.

Массовая концентрация п-нитрофенола в полученном растворе 0,02 мг/дм³.

Погрешность приготовления контрольного раствора ± 4,9 %.

Раствор хранят при комнатной температуре в течение не более 2 дней.

• 2.3 Приготовление контрольного растворова антрацена

  • 2.3.1 1 см³ ГСО состава антрацена в ацетонитриле с массовой концентрацией 200 мг/дм³ помещают в мерную колбу вместимостью 200 см³.

Массовая концентрация антрацена - 1 мг/дм³.

Погрешность приготовления контрольного раствора ± 2,2 %.

• 2.4 Приготовление исходного раствора кофеина

  • 2.4.1 Взвешивают в стакане около 200 мг кофеина, добавляют в стакан 25 мл дистиллированной воды, перемешивают. Полученный раствор переносят в мерную колбу вместимостью 100 см³. Ополаскивают стакан дистиллированной водой, переносят ее в мерную колбу, доводят до метки дистиллированной водой, перемешивают.

Содержание кофеина в исходном растворе (Со, мг/дм³) рассчитывают по формуле

•10'³ 0,1

где т - масса кофеина, мг;

С₁₀₀ - вместимость мерной колбы, V = 100 см³.

• 2.4.2 Приготовление контрольного раствора кофеина с массовой концентрацией 10 мг/дм³.

1 см³ исходного раствора кофеина переносят пипеткой вместимостью 1 см³ в мерную колбу вместимостью 200 см³. Доводят дистиллированной водой до метки, перемешивают.

Погрешность приготовления контрольного раствора ±1,5 %.

ПРИЛОЖЕНИЕ Б

ПРИЛОЖЕНИЕ В