Методика поверки «ГСОЕИ. Масс-спектрометры Orbitrap» (651-21-011 МП)

Первый заместитель генерального директора - заместитель по научной работе ФГУП «ВНИИФТРИ»

Общие положения

Настоящая методика распространяется на масс-спектрометры Orbitrap (далее- масс-спектрометры), изготавливаемые фирмой «Thermo Fisher Scientific» (Bremen) GmbH, Германия, и устанавливает процедуру, методы и средства их первичной и периодической поверок. Прослеживаемость результатов измерений при поверке масс-спектрометров Orbitrap       обеспечивается       согласно       ГОСТ       Р       8.735.0-2011

«ГСИ. Государственная поверочная схема для средств измерений содержания компонентов в жидких и твердых веществах и материалах. Основные положения».

Объем первичной и периодической поверок приведен в таблице 1.

Интервал между поверками - 12 месяцев.

• 1 Перечень операций поверки

1.1 При проведении первичной и периодической поверок выполняют операции, указанные в таблице 1.

Таблица 1 - Операции поверки

• 1.2 Не допускается проведение поверки отдельных измерительных каналов или отдельных автономных блоков или меньшего числа измеряемых величин или на меньшем числе поддиапазонов измерений.

• 1.3  Масс-спектрометры могут используются совместно с хроматографами утвержденного типа и удовлетворяющими техническим требованиям, указанным в таблице 2.

Таблица 2 - Требования к хроматографам

• 1.4  Допускается применять для периодической поверки масс-спектрометра контрольные растворы левомицетина или резерпина (по выбору).

• 1.5 При получении отрицательных результатов при выполнении любой из операций, приведенных в таблице 1. поверка прекращается и масс-спектрометр признается непригодным к применению.

• 2 Требования к условиям проведения поверки

• 2.1 Поверку масс-спектрометров проводить при следующих условиях:

• - температура окружающей среды, °C                              от +15 до +27;

• - атмосферное давления, кПа                                       от 84 до 106.7;

• - относительная влажность окружающего воздуха при 25 °C, %        от 20 до 80.

• 3 Требования к специалистам, осуществляющим поверку

• 3.1 Поверка должна осуществляться поверителями - специалистами организаций, аккредитованных на поверку средств измерений в соответствии с законодательством Российской Федерации об аккредитации в национальной системе аккредитации. Для получения данных, необходимых для поверки, допускается участие операторов, обслуживающих масс-спектрометр (под контролем поверителя).

• 4 Метрологические и технические требования к средствам поверки

4.1 При проведении поверки должны применяться средства поверки, указанные в таблице 3.

Таблица 3 - Средства поверки

4.2 Вместо указанных в таблице 3 средств поверки допускается применение других средств поверки, обеспечивающих определение метрологических характеристик поверяемых масс-спектрометров с требуемой точностью.

• 4.3 Все средства поверки должны быть исправны, поверены и иметь сведения о результатах поверки в Федеральном информационном фонде по обеспечению единства измерений.

• 5 Требования по обеспечению безопасности проведения поверки

• 5.1 Требования безопасности при поверке должны соответствовать требованиям, изложенным в настоящей методике поверки, руководстве по эксплуатации (РЭ) на масс-спектрометры. а также в эксплуатационной документации на поверочное оборудование и средства измерений.

• 6 Внешний осмотр средства измерений

• 6.1 При проведении внешнего осмотра должно быть установлено соответствие масс-спектрометров следующим требованиям:

- отсутствие механических повреждений и ослабленных элементов конструкции,

651-21-011 МП «ГСП. Масс-спектрометры Orbitrap. Методика поверки» сохранность пломб, чистота разъемов, состояние соединительных кабелей.

• - целостность корпуса, внешних элементов, отсутствие повреждений органов управления.

• 6.2 Результаты внешнего осмотра считать положительными, если выполняются требования п. 6.1. В противном случае поверка прекращается и масс-спектрометр признают негодным к применению.

• 7 Подготовка к поверке и опробование средства измерений

• 7.1  Подготовку масс-спектрометра к поверке выполняют в соответствии с руководством по его эксплуатации.

• 7.2 Перед проведением поверки готовят контрольные растворы в соответствии с приложением А настоящей методики.

• 7.3 Опробование масс-спектрометра заключается в его включении, запуске ПО и проверке общего функционирования: выход на режим, соответствие окон на дисплее, отсутствие сообщений об ошибке.

• 7.4 Результаты опробования считать положительными, если на дисплее появляется стартовое окно программы управления масс-спектрометром и отсутствуют сообщения об ошибках. В противном случае поверка прекращается и масс-спектрометр признают негодным к применению.

• 8 Проверка программного обеспечения средства измерений

• 8.1 Идентификация ПО осуществляется следующим образом:

• - в главном окне программы в строке команд щелкнуть мышью на команде «Help» («Помощь»). В открывшемся окне щелкнуть мышью по строке «About Home Page» («О программе»), в результате чего откроется окно, в котором приведены идентификационное название ПО и номер версии.

• 8.2 Результаты проверки считать положительными, если версия программного обеспечения «Xcalibur» 3.0 и выше. В противном случае поверка прекращается и масс-спектрометр признают негодным к применению.

• 9 Определение метрологических характеристик средств измерений

• 9.1 Определение отношения сигнал/шум

• 9.1.1 Ввести 1 мкл контрольного раствора «Левомицетин Г» (массовая концентрация 5 мкг/дм³ левомицетина) и с помощью ПО определить отношение сигнал/шум для пика левомицетина m/z 321.0051 (для детекторов высокого разрешения, окно экстракции при сборе хроматограммы-1.5 Da. разрешение не менее 60000. окно экстракции при определении соотношения сигнал/шум 5 ppm), в режиме отрицательной ионизации электроспреем с источником ионов ESI или H-ESI. в режиме регистрации SRM. параметры источников ионизации описаны в руководстве по эксплуатации. В расчете используется среднее квадратическое значение шума (RMS). Шумы выбирают на хроматограмме в диапазоне не менее 20 секунд.

• 9.1.2 Ввести 1 мкл контрольного раствора «Резерпин Г» (массовая концентрация 2 мкг/дм’ резерпина) и с помощью ПО определит отношение сигнал/шум для пика резерпина m/z 609,2807 (для детекторов высокого разрешения, окно экстракции при сборе хроматограммы-1.5 Da. разрешение не менее 60000. окно экстракции при определении соотношения сигнал/шум 5 ppm), в режиме положительной ионизации электроспреем с источником ионов ESI или H-ESI. в режиме регистрации SRM. параметры источников ионизации описаны в руководстве по эксплуатации. В расчете используется среднее квадратическое значение шума (RMS). Шумы выбирают на хроматограмме в диапазоне не менее 20 секунд.

Таблица 4

• 9.2 Определение ОСКО выходного сигнала

• 9.2.1 Определение ОСКО выходного сигнала проводить по контрольному раствору с массовой концентрацией 100 мкг/дм³ левомицетина или резерпина. Объем вводимой пробы - 1 мкл.

• 9.2.2 Контрольный раствор ввести 5 раз. измерить значения выходных сигналов (площадь пика и время удерживания) и вычислить их среднее арифметическое значение.

С помощью ПО определить ОСКО выходного сигнала по времени удерживания и площади пика. Или провести расчет ОСКО в % вручную по формуле (1):

_{CT =} J£O - S)²                            ₍₁₎

где S, - значение параметра выходного сигнала (площадь пика, время удерживания); 5 - среднее арифметическое значение параметра выходного сигнала, п - число измерений.

Таблица 5

9.3 Определение предела детектирования массовой доли

• 9.3.1  При определении предела детектирования С_тт использовать среднее арифметическое значение площадей пиков (5). полученное при определении значений ОСКО в п. 9.2.2 (формула (1)).

• 9.3.2 Предел детектирования массовой доли C_mj_n, %. рассчитать по формуле (2):

где ДХ - измеренная по п. 8.1 величина уровня флуктуационных шумов, имп;

m - масса введенного контрольного вещества, г; S - среднее арифметическое значение площадей пиков, имп с; U - расход элюента, см 7с. Рекомендованный поток элюента при определении предела детектирования составляет от 0.4 до 0.7 см³/мин.

Массу введенного контрольного вещества m рассчитать по формуле (3):

т = C₀-V_g,                            (3)

где С_о - концентрация контрольного вещества в растворе, г/см’ (210'⁹ г/см' для резерпина и 5-10'⁴ г/см'для левомицетина); Vg. - объем вводимого контрольного вещества (0.001 см³).

• 9.4 Определение относительного изменения выходных сигналов за 4 ч непрерывной работы

• 9.4.1 Условия и порядок измерений аналогичны описанным в п. 9.2. Через 4 часа непрерывной работы повторить измерения.

Относительное изменение параметров выходного сигнала за 4 часа непрерывной работы масс-спектрометра рассчитать по формуле (4):

где S - значение параметра выходного сигнала (площадь пика, время удерживания) в начале измерений (время работы t = 0 ч); S_t - среднее арифметическое значение параметра выходного сигнала через 4 часа непрерывной работы.

• 10  Подтверждение соответствия средства измерений метрологическим требованиям

• 10.1  Результаты поверки по определению отношения сигнал/шум считать положительными, если измеренные значения удовлетворяют значениям, приведенным в графе 4 таблицы 4.

• 10.2 Результаты поверки по определению ОСКО выходных сигналов считать положительными, если измеренные значения не превышают значений, приведенных в таблице 5.

• 10.3 Результаты поверки по определению предел детектирования массовой доли считать положительными, если предел детектирования массовой доли С_тт не превышает 10'⁸%.

• 10.4 Результаты поверки по определению значения относительного изменения выходных сигналов за 4 ч непрерывной работы считать положительными, если измеренные значения находятся в пределах: по площади пика ±10 %. по времени удерживания ±5 %.

• 10.5 При поверке масс-спектрометров Orbitrap установлено, что их максимальные пределы относительного изменения выходного сигнала за 4 часа непрерывной работы по площади пика составляют ±10 %. что соответствует требованиям, предъявляемым к рабочим средствам измерений по действующей государственной поверочной схеме для средств измерений содержания компонентов в жидких и твердых веществах и материалах, утвержденной приказом Госстандарта № 896-ст от 13 декабря 2011 г.

• 11 Оформление результатов поверки

• 11.1  Результаты поверки масс-спектрометра подтверждаются сведениями о результатах поверки средств измерений, включенными в Федеральный информационный фонд по обеспечению единства измерений. По заявлению владельца масс-спектрометра или лица, представившего его на поверку: на средство измерений наносится знак поверки, и (или) выдается свидетельство о поверке и (или) в паспорт масс-спектрометра вносится запись о проведенной поверке, заверяемая подписью поверителя и знаком поверки, с указанием даты поверки, или выдается извещение о непригодности к применению средства измерений.

• 11.2 Результаты поверки оформить в соответствии с приказом № 2510 от 31.07.2020 г. Министерства промышленности и торговли Российской Федерации.

Начальник НИО-6 ФГУП «ВНИИФТРИ»

Начальник лаборатории 670

ФГУП «ВНИИФТРИ»

В.И. Добровольский

А.А. Стахеев

ПРИЛОЖЕНИЕ А

МЕТОДИКА ПРИГОТОВЛЕНИЯ КОНТРОЛЬНОГО РАСТВОРА

А.1 Для приготовления контрольного раствора левомицетина применяют следующее оборудование и реактивы:

• - колбы мерные 2-го класса точности с притёртой пробкой по ГОСТ 1770-74;

• - пипетки градуированные 2-го класса точности по ГОСТ 29228-91:

• - ГСО 10165-2012 Стандартный образец левомицетина;

• - метанол для хроматографии кв. «ХЧ» по ТУ 6-09-1709-77;

- дистиллированная вода по ГОСТ 6709-72;

- весы лабораторные II класса точности по ГОСТ OIML R 76-1-2011 с пределом взвешивания 200 г.

Количесгво растворителя, необходимое для получения раствора требуемой концентрации, вычисляют, используя формулу (А.1):

(А.1)

А. 1.2 Приготовление контрольного раствора 100 мг/дм' (раствор «Левомицетин А»)

холодильнике.

А. 1.3 Приготовление раствора «Левомицетин Б» 1 мг/дм³

1 см' раствора «Левомицетин А» отбирают с помощью пипетки и переносят его в мерную колбу вместимостью 100 см³. доводят до метки метанолом.

651-21-011 МП «ГСП. Масс-спектрометры Orbitrap. Методика поверки» АПЛ Приготовление раствора «Левомицетин В» 100 мкг/дм'

10 см³ раствора «Левомицетин Б» отбирают с помощью пипетки и переносят его в мерную колбу вместимостью 100 см³. доводят до метки метанолом.

А. 1.5 Приготовление раствора «Левомицетин Г» 5 мкг/дм '

5 см~ раствора «Левомицетин В» отбирают с помощью пипетки и переносят его в мерную колбу вместимостью 100 см³, доводят до метки метанолом.

Таблица А1 - Характеристики СИ, используемых для приготовления контрольных растворов

При использовании средств измерений и стандартных образцов и реактивов, указанных в п.А.1 настоящего приложения, относительная погрешность контрольного раствора, приготовленного по данной методике, находится в пределах ±5 %.

А.2 Для приготовления контрольного раствора резерпина применяют следующее оборудование и реактивы:

• - резерпин по ФС № 423267-96;

• - ацетонитрил для жидкостной хроматографии;

• - дистиллированная вода по ГОСТ 6709-72;

• - колбы мерные 2-го класса точности с притёртой пробкой по ГОСТ 1770-74;

• - пипетки градуированные 2-го класса точности по ГОСТ 29228-91:

• - весы лабораторные II класса точности по ГОСТ OIML R 76-1-2011 с пределом взвешивания 200 г.

А.2.1 Приготовление элюента «ЭР» резерпина

В мерную колбу вместимостью 300 мл помещают 100 мл ацетонитрила и 100 мл воды. Перемешивают раствор.

А.2.2 Приготовление растворов резерпина в элюенте

А.2.2.1 Приготовление исходного раствора «Резерпин А»

Взвешивают 10 мг резерпина в бюксе. Градуированной пипеткой добавляют в бюксу 2 см³ элюента «ЭР», после чего сливают полученную смесь в мерную колбу вместимостью 100 см³. Повторяют данную операцию 2-3 раза для полного переноса контрольного вещества в колбу. Доводят объём раствора в колбе до метки элюентом «ЭР».

Массовая концентрация резерпина в растворе «Резерпин А» составляет 100 мг/дм\

А.2.2.2 Приготовление контрольного раствора «Резерпин Б»

• 1 см³ контрольного раствора «Резерпин А» градуированной пипеткой помещают в мерную колбу вместимостью 100 см³ и доводят объём до метки элюентом «ЭР».

Массовая концентрация резерпина в растворе «Резерпин Б» составляет 1 мг/дм³.

А.2.2.3 Приготовление контрольного раствора «Резерпин В»

10 см³ контрольного раствора «Резерпин Б» градуированной пипеткой помещают в мерную колбу вместимостью 100 см³ и доводят объём до метки элюентом «ЭР».

Массовая концентрация резерпина в растворе «Резерпин В» составляет 100 мкг/дм^?.

А.2.2.4 Приготовление контрольного раствора «Резерпин Г»

• 2 см³ контрольного раствора «Резерпин В» градуированной пипеткой помещают в мерную колбу вместимостью 100 см³ и доводят объём до метки элюентом «ЭР».

Массовая концентрация резерпина в растворе «Резерпин Г» составляет 2 мкг/дм³. Таблица А2 - Характеристики СИ, используемых для приготовления контрольных

растворов

А.2.4 При использовании средств измерений и стандартных образцов и реактивов, указанных в п.А.2 настоящего приложения, относительная погрешность контрольного раствора, приготовленного по данной методике, находится в пределах ± 5 %

Ю