Методика поверки «Хроматографы жидкостные LC-30 NEXERA с детекторами SPD-M30A, RID-20A, Decade Elite, Decade Lite, LCMS-8030, LCMS-8040» (МП 63487-16)

УТВЕРЖДАЮ

Иванникова

директора метрологии "ВНИИМС"

Хроматографы жидкостные LC-30 NEXERA с детекторами SPD-M30A, RID-20A, Decade Elite, Decade Lite, LCMS-8030, LCMS-8040

Методика поверки

МП 63487-16

с изменением № 1

Москва 2017 г.

Настоящая методика распространяется на хроматографы жидкостные LC-30 NEXERA с детекторами SPD-M30A, RID-20A, Decade Elite, Decade Lite, LCMS-8030, LCMS-8040 фирмы "SHIMADZU CORPORATION", Япония, фирмы "SHIMADZU U.S.A. MANUFACTURING, INC.", США, (далее - хроматографы) и устанавливает методику их первичной и периодической поверки.

Интервал между поверками - 1 год.

• 1 ОПЕРАЦИИ ПОВЕРКИ

1.1 При проведении поверки выполняют операции, указанные в таблице 1. Таблица 1

Примечание:

^!)При отсутствии НД на методику измерений, утвержденного в установленном порядке по

ГОСТ Р 8.563 -2009.

²⁾При наличии НД на методику измерений.

• 1.2 Допускается проводить первичную поверку хроматографов жидкостных жидкостные LC-30 NEXERA с детекторами SPD-M30A, RID-20A, Decade Elite, Decade Lite, LCMS-8030, LCMS-8040, имеющих несколько детекторов, с детекторами, входящими в комплект хроматографа в соответствии с заказом.

• 1.3 Периодическую поверку хроматографов жидкостных жидкостные LC-30 NEXERA с детекторами SPD-M30A, RID-20A, Decade Elite, Decade Lite, LCMS-8030, LCMS-8040 допускается проводить на основании письменного заявления владельца с теми детекторами, с которыми хроматограф эксплуатируется.

• 2 СРЕДСТВА ПОВЕРКИ

• 2.1 При проведении поверки применяют средства поверки:

• - ГСО 8749-2006 состава антрацена в ацетонитриле, массовая концентрация антрацена 0,200 мг/см³;

• - ГСО 7346-96 состава фенола, массовая концентрация фенола 1 г/дм³;

• - МСО 0389:2002 состава водного раствора глюкозы, молярная концентрация глюкозы 10,00 ммоль/дм³;

• - кофеин с содержанием основного вещества не менее 98 %;

• - резерпин фармакопейный, ФС-423267-96;

• - папаверина гидрохлорид фармакопейный, ФС-420267-07.

• 2.2 При проведении поверки применяют следующие вспомогательные средства поверки:

• - ацетонитрил для жидкостной хроматографии, ТУ 6-09-14-2167-84;

• - вода для лабораторного анализа (бидистиллированная или деионизированная), ГОСТ Р 52501-2005;

• - азот газообразный очищенный, ГОСТ 9293-74, высший сорт;

• - колонки для высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ):

• - Discovery Cl8 (250 мм х 4.6 мм средний размер частиц 5 мкм);

• - Shim-pack VP-ODS (150 мм х 4.6 мм, средний размер частиц 5 мкм);

• - Pathfinder AS column (50 мм х 4.6 мм, средний размер частиц 2.5 мкм);

• - Supelcosil-LC-NH2 (250 мм х 4,6 мм, средний размер частиц 5 мкм);

• - термометр типа ТЛ4 № 2, ТУ 25-2021.003-88;

• - психрометр аспирационный М-34-М по ГРПИ 405132.001 ТУ;

• - барометр-анероид БАММ-1 по ТУ 25-04-1618.

Допускается применение аналогичных средств поверки, обеспечивающих определение метрологических характеристик поверяемых СИ с требуемой точностью.

• 3 УСЛОВИЯ ПОВЕРКИ И ПОДГОТОВКА К НЕЙ

• 3.1 При проведении поверки соблюдают условия:

• - температура окружающего воздуха, °C                           23 ± 5

• - атмосферное давление, кПА                                 от 84 до 106,7

• - относительная влажность воздуха, %                          от 30 до 90

• - напряжение переменного тока, В                             220 ±10%

• - частота сети, Гц                                                50 ± 1 %

• 3.2 Подготовительные работы выполняют в соответствии с руководством по эксплуатации хроматографа.

• 3.3 Перед проведением поверки готовят контрольные растворы (методика приготовления контрольных растворов дана в приложении А).

• 4 ПРОВЕДЕНИЕ ПОВЕРКИ

• 4.1 Внешний осмотр

При внешнем осмотре устанавливают

• - соответствие комплектности хроматографа паспортным данным;

• - четкость маркировки;

• - исправность механизмов и крепежных деталей.

Не допускается наличие дефектов, которые могут повлиять на работоспособность хроматографа.

• 4.2 Опробование

При опробовании определяют уровень флуктуационных шумов и дрейф нулевого сигнала, отношение сигнал/шум масс-спектрометрических детекторов и предел детектирования. При определении уровня флуктуационных шумов и дрейфа нулевого сигнала хроматографическую колонку заменяют на капилляр из материала РЕЕК длиной не менее 30-50 см и внутренним диаметром 0,1 мм, который создает необходимое для проведения измерений противодавление. Допускается устанавливать колонку, если при использовании капилляра не удается создать необходимое противодавление.

• 4.2.1 Уровень флуктуационных шумов и дрейф нулевого сигнала детектора определяют при условиях, указанных в таблице 3. Через час после выхода хроматографа на режим записывают в течение 15 мин нулевой сигнал каждого детектора на наиболее чувствительной шкале прибора.

Уровень флуктуационных шумов нулевого сигнала (Ах) принимают равным амплитуде h повторяющихся колебаний нулевого сигнала с периодом не более 20 с. Уровень флуктуационных шумов определяют в микровольтах с дальнейшим пересчетом в единицы физических величин, приведенные в Приложении Б.

• 4.2.2 За дрейф нулевого сигнала принимают наибольшее смещение уровня нулевого сигнала в течение 1 ч при регистрации хроматограммы без ввода пробы. Допускается регистрировать нулевой сигнал в течение 30 мин с последующей экстраполяцией до 1 ч.

Таблица 3

• 4.2.3 Отношение сигнал-шум измеряют при условиях, указанных в таблице 4. Вводят пробу контрольного вещества. Находят значение отношения сигнал/шум (S/N) для пика со значением m/z по таблице 4, используя программное обеспечение "LabSolutions".

• 4.2.4 Определение предела детектирования и метрологических характеристик выполняют на хроматографе, укомплектованном соответствующим детектором и аналитической колонкой.

Предел детектирования оценивают с использованием контрольных растворов и условий, указанных в таблице 4.

В хроматограф вводят пробу контрольного раствора и определяют высоту или площадь пика (S).

Предел детектирования в г/см³ рассчитывают по формулам

ИЛИ

где V - скорость элюента, см³/мин;

/Hq ₅    - ширина пика на половине высоты, мин;

Дх - уровень флуктуационных шумов нулевого сигнала, определенный до ввода контрольного вещества;

Н - высота пика контрольного вещества;

ДХ и Н - измеряют в мм, условных единицах, мкВ, либо в единицах, указанных в Приложении Б и В;

S      - площадь пика контрольного вещества, мкВ с;

G - количество контрольного вещества, г;

G = W~'^>C-V_d„,

где С - массовая концентрация контрольного вещества, мг/дм³; К_доз - объем введенной пробы контрольного вещества, мкл. 10'⁹ - пересчетный множитель.

Результаты определения признают положительными, если полученные значения предела детектирования не превышают значений, указанных в приложении Б.

4.3 Определение метрологических характеристик

• 4.3.1 Определение относительного среднего квадратического отклонения (СКО) выходных сигналов

Контрольный раствор (табл.4.) вводят в хроматограф не менее 6 раз, измеряют значения выходных сигналов (времени удерживания и площади пиков) и вычисляют среднее арифметическое значение выходных сигналов (X).

Относительное среднее квадратическое отклонение выходного сигнала рассчитывают по формуле где Xj - i-oe значение параметра выходного сигнала (площади пика, времени удерживания).

Значения относительного среднего квадратического отклонения выходного сигнала не должны превышать значений, указанных в приложении В.

Таблица 4

(Измененная редакция, Изм.№ 1).

^])В том случае, если используют другой объем вводимой пробы (например, установлена петля другой вместимости), допускается соответствующим образом изменить концентрацию контрольного раствора.

²⁾Допускается использовать другой элюент при условии, что значение фактора удерживания (&’) будет не менее 2. &’=( tR - to) I to,

где tR - время удерживания анализируемого компонента;

to - время элюирования неудерживаемого компонента (мертвое время).

³⁾Допускается использовать иную скорость потока, в случае если конфигурация системы (применяемые колонки и т. п.) не рассчитана на работу с потоком 1 см³/мин.

^Контрольное вещество выбирают в зависимости от конфигурации хроматографа.

• 4,3.2 Определение относительного изменения выходного сигнала за 8 часов непрерывной работы.

Условия измерений аналогичны, приведенным в разделе 3. Проводят операции, описанные в п.4.3.1. Через 8 часов непрерывной работы повторяют измерения по п.4.3.1.

Относительное изменение выходного сигнала за 8 часов непрерывной работы хроматографа рассчитывают по формуле

где X, - i-oe значение параметра выходного сигнала (площади пика, времени удерживания).

Значения относительного изменения выходного сигнала за 8 часов непрерывной работы хроматографа не должно превышать значений, указанных в приложении В.

• 4.3.3 При проведении периодической поверки хроматографов, эксплуатируемых по НД на методики, отвечающим требованиям ГОСТ Р 8.563-2009, проверяют показатели точности результатов измерений в соответствии с процедурами и нормативами контроля, регламентированными в методике измерений.

5.ОФОРМЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ПОВЕРКИ

• 5.1 Результаты поверки хроматографов заносят в протокол произвольной формы.

• 5.2 Положительные результаты поверки хроматографов оформляют выдачей свидетельства в соответствии с Порядком проведения поверки средств измерений, требования к знаку поверки и содержанию свидетельства о поверке (утв. приказом Минпромторга России № 1815 от 02.07.2015 г.).

• 5.3 На хроматографы, не удовлетворяющие требованиям настоящей методики поверки, выдают извещение о непригодности с указанием причин в соответствии с Порядком проведения поверки средств измерений, требования к знаку поверки и содержанию свидетельства о поверке (утв. приказом Минпромторга России № 1815 от 02.07.2015 г.).

  Начальник отдела ФГУП "ВНИИМС"

  Начальник сектора ФГУП "ВНИИМС", к.х.н.

  

  С.В. Вихрова

  О.Л. Рутенберг

МЕТОДИКА ПРИГОТОВЛЕНИЯ КОНТРОЛЬНЫХ РАСТВОРОВ

Методика предназначена для приготовления контрольных растворов антрацена, кофеина, фенола и глюкозы.

• 1 СРЕДСТВА ИЗМЕРЕНИЙ, ПОСУДА, РЕАКТИВЫ

  • 1.1 ГСО 8749-2006 состава антрацена в ацетонитриле, массовая концентрация антрацена 0,200 мг/см³.

  • 1.2 ГСО 7346-96 состава фенола, массовая концентрация фенола 1 г/дм³.

  • 1.3 МСО 0389:2002 состава водного раствора глюкозы (10,00 ммоль/дм³).

  • 1.4 Кофеин фармакопейный; содержание основного вещества не менее 98 %.

  • 1.5 Резерпин, ФС № 423267-96 или резерпин с содержанием основного вещества не менее 99,0, CAS 50-55-5, номер 83580 по каталогу Sigma-Aldrich.

  • 1.6 Папаверина гидрохлорид, ФС-420267-07.

  • 1.7 Весы лабораторные по ГОСТ OIML R 76-1-2011, с наибольшим пределом взвешивания 200 г.

  • 1.8 Колбы мерные наливные 2-100-2,2-200-2, ГОСТ 1770-74.

  • 1.9 Пипетки градуированные 1-2-2-1, 1-2-2-10, ГОСТ 29227-91 (I).

  • 1.10 Стаканы В-1-50ТС, ГОСТ 25336-82.

  • 1.11 Вода для лабораторного анализа (бидистиллированная или деионизированная), ГОСТ Р 52501-2005.

  • 1.12 Дистиллированная вода, ГОСТ 6709-72.

• 2 ПРОЦЕДУРА ПРИГОТОВЛЕНИЯ

  • 2.1 Приготовление раствора с массовой концентрацией фенола 5 мг/дм³

    • 2.1.1 Пипеткой вместимостью 1 см³ переносят 1 см³ ГСО фенола в этаноле в мерную колбу вместимостью 200 см³ и доводят содержимое колбы до метки ацетонитрилом.

  • 2.2 Приготовление раствора глюкозы с массовой концентрацией 90 мг/дм³

10 см³ МСО раствора глюкозы пипеткой вместимостью 10 см³ переносят в мерную колбу вместимостью 200 см³ и доводят содержимое колбы до метки деионизированной водой.

• 2.3 Приготовление контрольных растворов антрацена

  • 2.3.1 Приготовление раствора антрацена в ацетонитриле

1 см³ ГСО состава антрацена в ацетонитриле с массовой концентрацией 200 мг/дм³ помещают в мерную колбу вместимостью 200 см³.

Массовая концентрация антрацена - 1 мг/дм³.

• 2.4 Приготовление исходного раствора кофеина

  • 2.4.1 Взвешивают в стакане около 200 мг кофеина, добавляют в стакан 25 мл дистиллированной воды, перемешивают. Полученный раствор переносят в мерную колбу вместимостью 100 см³. Ополаскивают стакан дистиллированной водой, переносят ее в мерную колбу, доводят до метки дистиллированной деионизированной водой, перемешивают.

Содержание кофеина в исходном растворе (С_о мг/дм³) рассчитывают по формуле

_ т _ т

^О_Г_)оо-1О-³~ОД’

где т - масса кофеина, мг;

И₁₀₀ - вместимость мерной колбы, V = 100 см³.

• 2.4.2 Приготовление аттестованного раствора кофеина с массовой концентрацией 10 мг/дм³

1 см³ исходного раствора кофеина переносят пипеткой вместимостью 1 см³ в мерную колбу вместимостью 200 см³. Доводят дистиллированной деионизированной водой до метки, перемешивают.

• 2.5 Приготовление исходного раствора резерпина с массовой концентрацией 10 мг/дм³

  • 2.5.1 Взвешивают в стакане 10,0 мг резерпина, добавляют 25 см³ ацетонитрила, перемешивают. Полученный раствор переносят в мерную колбу вместимостью 1000 см³. Ополаскивают стакан ацетонитрилом, раствор переносят в мерную колбу, доводят до метки ацетонитрилом, перемешивают.

  • 2.5.2 Приготовление раствора резерпина с массовой концентрацией 0,1 мг/дм³

1 см³ раствора, приготовленного по п.2.1.1, переносят в мерную колбу вместимостью 100 см³ и доводят до метки ацетонитрилом.

• 2.5.3 Приготовление контрольного раствора резерпина с массовой концентрацией 0,001 мг/дм³

1 см³ раствора, приготовленного по п.2.1.2, переносят в мерную колбу вместимостью 100 см³ и доводят до метки ацетонитрилом.

Погрешность приготовления контрольного раствора ± 5 %.

• 2.6 Приготовление исходного раствора папаверина с массовой концентрацией 10 мг/дм³

  • 2.6.1 Взвешивают в стакане 10,0 мг папаверина, добавляют 25 см³ воды, перемешивают. Полученный раствор переносят в мерную колбу вместимостью 1000 см³. Ополаскивают стакан водой, раствор переносят в мерную колбу, доводят до метки водой, перемешивают.

  • 2.6.2 Приготовление контрольного раствора папаверина с массовой концентрацией 0,01 мг/дм³

1 см³ раствора, приготовленного по п.2.2.1, переносят в мерную колбу вместимостью 1000 см³ и доводят до метки водой.

Массовая концентрация полученного раствора 0,01 мг/дм³.

Погрешность приготовления контрольного раствора ± 4,9 %.

Таблица Б.1

(Измененная редакция, Изм.№ 1).

Таблица В. 1

(Измененная редакция, Изм.№ 1).