Инструкция «Хроматографы жидкостные Dionex UltiMate 3000» (Код не указан!)

УТВЕРЖДАЮ

ИНСТРУКЦИЯ

ХРОМАТОГ РАФЫ ЖИДКОСТИЫ Е

Dionex UltiMate 3000

Методика поверки

Москва 2014 г.

Настоящая инструкция распространяется на хроматографы жидкостные Dionex UltiMate 3000 со спектрофотометрическими детекторами с переменной длиной волны VWD-3100, VWD-3400RS, со спектрофотометрическими детекторами многоволновыми MWD-3000, MWD-3000RS, с детекторами на диодной матрице DAD-3000, DAD-3000RS, рефрактометрическими детекторами RI-101, RefractoMax 520, 521, флуориметрическими детекторами FLD-3100, FLD-3400RS, детекторами заряженного аэрозоля Corona CAD, Corona uitra RS, Corona Veo, электрохимическими детекторами ECD-3000RS, Coulochem фирмы "Thermo Fisher Scientific (San Jose)", США, фирмой "Dionex Softron GmbH", Германия, (далее - хроматографы) и устанавливает методы и средства их первичной и периодической поверок.

Интервал между поверками - 1 год.

• 1 ОПЕРАЦИИ ПОВЕРКИ

  • 1.1 При проведении поверки выполняют операции, указанные в таблице 1.

Таблица 1

• - капилляр РЕЕК, внутренний диаметр 0,25 мм, длиной 6 м;

• - капилляр РЕЕК, вн. диаметр 0,075 мм, длиной 0,3 м;

• - фитинг с ферулой 10-32,1/4" - 4 шт.

• - соединитель 10-32.

Допускается применять другие средства поверки, метрологические характеристики которых соответствуют указанным в настоящей инструкции.

• 3 УСЛОВИЯ ПОВЕРКИ И ПОДГОТОВКА К НЕЙ

  • 3.1 При проведении поверки соблюдают следующие условия:

• - температура окружающего воздуха, °C                                25 ± 5

• - атмосферное давление, кПа                                        от 84 до 106,7

• - относительная влажность воздуха, %                               от 30 до 90

• - напряжение переменного тока, В                                    220 ± 22

• - частота сети, Гц                                                         50 ± 1

• 3.2 Перед проведением поверки выполняют следующие подготовительные работы.

  • 3.2.1 Хроматографы готовят к работе в соответствии с руководством по эксплуатации.

Устанавливают между инжектором и детектором регулятор давления (около 70 бар), состоящий из двух капилляров, соединенных вместе. В качестве регулятора давления можно использовать капилляры, входящие в набор для OQ/PQ соответствующих детекторов. Устанавливают скорость потока подвижной фазы 1 мл/мин. Перед включением детекторов хроматографическую систему промывают подвижной фазой не менее 10 мин.

• 3.2.2 Источник света абсорбционных детекторов VWD-3100, VWD-3400RS, MWD-3000, MWD-3000RS, DAD-3000 и DAD-3000RS включают за 6 часов до начала поверки.

• 3.2.3 Флуориметрические детекторы FLD-3100 и FLD-3400RS включают за 30 мин до начала поверки.

• 3.2.4 Включают рефрактометрические детекторы модели RI-101, RefractoMax 520 и RefractoMax 521 и устанавливают требуемый режим, промывают рабочую и сравнительную ячейки за 1 час до начала поверки.

• 3.2.5 Детекторы заряженного аэрозоля включают в следующей последовательности: устанавливают значение давления потока газа 2,41 бара (35 psi ± 1), через 5 мин включают насос и промывают систему в течение 15 мин, не подсоединяя ее к детектору. Затем подсоединяют детектор к системе и дают поработать не менее часа перед процедурой поверки.

• 3.2.6 Включают электрохимические детекторы, устанавливают требуемый режим и дают проработать не менее часа.

• 3.2.7 Для приготовления подвижной фазы используют деионизированную воду. Подвижную фазу дегазируют.

3.3 Перед проведением поверки готовят контрольные растворы, назначение и содержание анализируемых компонентов в которых приведены в таблице 2. Процедура приготовления контрольных растворов приведена в приложении 1.

Таблица 2

• 4 ПРОВЕДЕНИЕ ПОВЕРКИ

  • 4.1 Внешний осмотр

При внешнем осмотре устанавливают:

• - соответствие комплектности хроматографа паспортным данным;

• - четкость маркировки;

• - исправность механизмов и крепежных деталей;

• - отсутствие протечек жидкостного тракта хроматографа.

• 4.2 Опробование

При опробовании проводят определение уровня флуктуационных шумов, дрейфа нулевого сигнала, предела детектирования отношения сигнал/шум Рамановского спектра воды для флуориметрического детектора.

Для проверки шума и дрейфа электрохимических детекторов отсоединяют детектор от хроматографической системы и устанавливают на нем имитатор ячейки.

Для сбора данных используют OQ/PQ шаблоны ПО Chromeleon, входящего в комплект поставки хроматографа.

• 4.2.1 Уровень флуктуационных шумов и дрейф нулевого сигнала определяют при условиях, указанных в таблице 3. Уровень флуктуационных шумов и дрейф нулевого сигнала измеряют в динамическом режиме в течение 30 мин.

• 4.2.2 Уровень флуктуационных шумов нулевого сигнала (АХ) принимают равным амплитуде (/?) повторяющихся колебаний нулевого сигнала с периодом не более 20 секунд. Пример расчета значений шума и дрейфа приведен в приложении 2.

Таблица 3

*после определения значений шума и дрейфа устанавливают стеклоуглеродный(ОС) электрод.

Полученные значения не должны превышать значений, приведенных в таблице 4. Таблица 4

• 4.2.3 Определение предела детектирования

Определение предела детектирования и метрологических характеристик выполняют на хроматографе, укомплектованном соответствующим детектором с ячейкой и хроматографической колонкой.

Предел детектирования определяют с использованием контрольных веществ и условий, указанных в таблице 2.

В хроматограф водят пробу контрольного вещества, определяют высоту и ширину пика на половине его высоты (//_{0 5} ).

Предел детектирования рассчитывают по формуле

2АгС

мин.     ГТ         ТЛ ⁹

^н ■ А),5 • ^v

где G„„_H - количество контрольного вещества, г;

G = C-V_i)n3,

где С - массовая концентрация контрольного вещества, г/дм³;

V_d03 - объем введенной пробы контрольного вещества, дм³;

V - скорость потока элюента, см³/мин;

//_{0 5} - ширина пика на половине высоты, мин;

Ах - уровень флуктуационных шумов нулевого сигнала, определенный до ввода контрольного вещества;

Н - высота пика контрольного вещества;

ДХ и Н - измеряют в мм, условных единицах, мВ, единицах шкалы, либо в единицах, указанных в таблице 4.

Полученные результаты не должны превышать приведенных ниже значений предела детектирования (таблица 5).

Таблица 5

• 4.2.4 Определение сигнал/шум флуориметричческого детектора для Рамановского спектра воды.

Отношение сигнал/шум флуориметричческого детектора для Рамановского спектра рассеяния дистиллированной воды определяют при длине волны возбуждения 350 нм и эмиссии 397 нм.

Отключают колонку, заменяют водой подвижную фазу в системе ВЭЖХ, если подвижная фаза (ПФ) не смешивается с водой, то сначала заменяют ПФ промежуточным растворителем, который смешивается с ПФ и водой. Затем заменяют этот растворитель водой, промывают автосамплер (инжектор) и насос. Соединяют регулятор давления, инжектор и детектор при помощи капилляров и фитингов, входящих в комплект поставки.

Устанавливают скорость потока элюента 1 мл/мин или 0,25 мл/мин для микроячейки.

В ПО Chromeleon 7.Х выбирают меню TOOLS, далее INSTRUMENT Qualification для флуориметрического детектора (FLD). После этого в программе создается последовательность операций: прогрев детектора и снятие Рамановского спектра воды. По окончании регистрации спектра генерируется отчет для хроматограммы FLuorecence Det SNR. Для получения отношения сигнал/шум используют отчет PQ OQ Report XX, где XX версия шаблона (например, 8 4), и выбирают соответствующую страницу отчета FL DET SNR.

Для ПО Chromeleon 6.Х проводят аналогичную процедуру, предварительно установив диск с шаблонами в дисковод компьютера.

Полученное значение отношения сигнал/шум должно быть не менее 550 : 1.

• 4.3 Определение метрологических характеристик

  • 4.3.1 Определение относительного среднего квадратического отклонения параметров выходного сигнала.

Измерения проводят после выхода хроматографа на режим. Условия выполнения измерений должны соответствовать приведенным в разделе 3.

• 4.3.2 Контрольный раствор (табл.2.) вводят в хроматограф не менее 6 раз, измеряют значения выходных сигналов (высот, площадей пиков и времен удерживания) и вычисляют их среднее арифметическое значение.

• 4.3.3 Относительное среднее квадратическое отклонение выходного сигнала рассчитывают по формуле

  
  Is*,-*)²

где X - среднее арифметическое значение параметра выходного сигнала (площади пика, времени удерживания).

• 4.3.4 Значения относительного среднего квадратического отклонения выходного сигнала (площади и времени удерживания), %, не должны превышать данных, приведенных в таблице 6.

Таблица 6               

• 4.3.5 Определение относительного изменения выходных сигналов за 8 часов непрерывной работы.

Условия измерений аналогичны, описанным в разделе 3. Проводят операции, описанные в п.4.3.2. Через 8 часов непрерывной работы повторяют измерения по п.4.3.2.

Относительное изменение выходного сигнала за 8 часов непрерывной работы хроматографа рассчитывают по формуле

4.3.6 Значения относительного изменения выходных сигналов не должны превышать значений, приведенных в таблице 7.

Таблица 7

5 ОФОРМЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ПОВЕРКИ

• 5.1 Результаты поверки хроматографов заносят в протокол.

При использовании системы обработки данных "Chromeleon" протоколы с результатами поверки формируются автоматически.

• 5.2 Положительные результаты поверки хроматографов оформляют выдачей свидетельства в соответствии с ПР 50.2.006.

• 5.3 Хроматографы, не удовлетворяющие требованиям настоящих рекомендаций, к эксплуатации не допускаются. Хроматографы изымаются из обращения. Свидетельство о поверке изымают и выдают извещение о непригодности с указанием причин в соответствии с ПР 50.2.006.

• 5.4 После ремонта хроматографы подвергают поверке.

  Начальник сектора ФГУП "ВНИИМС

  

  О.Л.Рутенберг

Приложение 1

МЕТОДИКА ПРИГОТОВЛЕНИЯ АТТЕСТОВАННЫХ РАСТВОРОВ

Методика предназначена для приготовления водных растворов фенола и глюкозы, а так же раствора антрацена в подвижной фазе.

• 1 СРЕДСТВА ИЗМЕРЕНИЙ, ПОСУДА, РЕАКТИВЫ

  • 1.1 ГСО 8749-2006 состава раствора антрацена в ацетонитриле, 0,2 мг/см³.

  • 1.2 МСО 0389:2002 состава водного раствора глюкозы, 100,00 ммоль/дм³.

  • 1.3 ГСО 7346-96 состава фенола в этаноле, 1 мг/см³.

  • 1.4 ГСО 10111-2012 состава глицерина в воде с массовой долей 5 %, комплект СТГ-1.

  • 1.5 Колбы мерные наливные 2-100-2, 2-50-2, 2-1000-2 по ГОСТ 1770-74.

  • 1.6 Пипетки градуированные 1—2—2—0,5,1-2-2-5, 1-2-2-2, по ГОСТ 29227-91 (I).

  • 1.7 Стаканы В-1-50ТС по ГОСТ 25336-82.

  • 1.8 Дистиллированная вода по ГОСТ 6709-72.

  • 1.9 Ацетонитрил для жидкостной хроматографии ТУ 6-09-14-2167-84.

  • 1.10 Весы лабораторные 2 кл. ВЛР-200 или аналог.

• 2 ПРОЦЕДУРА ПРИГОТОВЛЕНИЯ

  • 2.1 Приготовление контрольных растворов антрацена

    • 2.1.1 Приготовление контрольного раствора № 1 с массовой концентрацией антрацена 1,0 мг/дм³ в подвижной фазе.

0,5 см3 ГСО состава антрацена в ацетонитриле с массовой концентрацией 0,2 мг/см³ (200 мг/дмЗ) градуированной пипеткой помещают в мерную колбу вместимостью 100 см³ и доводят объем до метки раствором подвижной фазы (ацетонитрил : вода с объемным отношением 80 :20).

Погрешность приготовления контрольного раствора № 1 ± 1,5 %.

Контрольный раствор № 1 используют для определения предела детектирования и метрологических характеристик спектрофотометрических детекторов VWD 3100, VWD 3400RS, MWD 3000, MWD 3000RS, DAD 3000 и DAD 3000RS

• 2.1.2 Приготовление контрольного раствора № 2 с массовой концентрацией антрацена 0,1 мг/дм³ в подвижной фазе.

5 см³ раствора № 1 с массовой концентрацией 1,0 мг/дм³ градуированной пипеткой помещают в мерную колбу вместимостью 50 см³ и доводят объем до метки раствором подвижной фазы (ацетонитрил : вода с объемным отношением 80 : 20).

Погрешность приготовления контрольного раствора № 2 ± 1,5 %.

Контрольный раствор № 2 используют для определения предела детектирования и метрологических характеристик флуориметрического детектора FLD 3100 и FLD 3400RS.

2.2. Приготовление контрольного раствора № 3 с массовой концентрацией глюкозы 20 мг/дм³

• 1,1 см³ МСО раствора глюкозы пипеткой вместимостью 2 см³ переносят в мерную колбу вместимостью 1000 см³ и доводят содержимое колбы до метки дистиллированной водой.

Относительная погрешность приготовления контрольного раствора № 3 ± 1,5 %.

Контрольный раствор № 3 используют для определения предела детектирования и метрологических характеристик детектора заряженного аэрозоля Corona CAD, Corona Ultra и Corona Veo.

• 2.3 Приготовление контрольного раствора № 4 с массовой концентрацией фенола 0,5 мг/дм³ в элюенте.

• 2.3.1 1 см³ раствора фенола в этаноле отбирают пипеткой вместимостью 1 см³ и переносят в мерную колбу вместимостью 100 см³. Доводят до метки элюентом (ацетонитрил : вода : фосфорная кислота 30:69,8: 0,2) тщательно перемешивают.

• 2.3.2 5 см³ раствора, полученного по п. 2.3.1, переносят пипеткой вместимостью 5 см³ в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят до метки элюентом (ацетонитрил : вода : фосфорная кислота 30:69,8: 0,2).

Относительная погрешность приготовления контрольного раствора № 4 ±1,5 %.

Контрольный раствор № 4 используют для определения предела детектирования и метрологических характеристик электрохимического детектора ECD 3000RS и Coulochem.

• 2.4 Приготовление контрольного раствора № 5 с массовой концентрацией глицерина 20 мг/дм³ в воде.

  • 2.4.1 Навеску водного раствора глицерина с массовой долей 5 % массой 1 г вносят в мерную колбу вместимостью. 100 см³. Доводят до метки водой и тщательно перемешивают.

  • 2.4.2 4 см³ раствора полученного по п. 2.4.1 мерной пипеткой вместимостью 5 мл переносят в мерную колбу вместимостью 100 см³ и доводят до метки и тщательно перемешивают.

Относительная погрешность приготовления контрольного раствора № 5 ± 1,5 %.

Контрольный раствор № 5 используют для определения предела детектирования и метрологических характеристик рефрактометрического детектора модели RI-101, 520 и 521.

Приложение 2

ПРИМЕР РАСЧЕТА ШУМА И ДРЕЙФА

Данное приложение предназначено для упрощения и автоматизации процедуры расчета шума и дрейфа

1 Процедуру сбора данных для расчета шума и дрейфа производят без инжекции, для этого в программе Chromelon в очереди устанавливают тип образца как Blank (Бланк) вместо Unknown (неизвестный).

2. В Программе Chromeleon, выбирают хроматограмму, для которой ведется расчет шума и дрейфа, далее в окошке Result выбирают вкладку Summary и добавляют новую колонку, нажав правую кнопку мыши (рис 1).

J hone

here

here

* Chanods

г.-р_'_Рге5£уе

* Processing Шик

^Fc.erh

ViewSelm^

■3.0G2K

-О.ССЗОО

■0.00400

T

Рис. 1 Окно Summary

• 2.1 Добавляют характеристики для расчета дрейфа согласно рис. 2.

  ' 1п|«с1мм

  "J None

  Ъ-

  1

  Add Report Cdumn

  а ММе QremrtSiorr R»»je Sbt Tine (CobraJ ЛлиЬвгаГ PeSs

  Mt TheMi (Cobra)

  Выберите категорию Chromatogram и переменную Signal Drift

  CO J

  р№_^:_Рт«$:Гй

  SwteSMi

  йваМ

  

  ДОКМе

  SjdStlMbc iydlM !»И<1 УВи

  

  Укажите диапазон не менее 30 мин для сбора данных нажните ОК а обеих

  IM

  окнах

  Добавьте несколько нулей после запятой для падуче мя еомьтбтшр

  fame О.ОШЯ

  Charat

  

  u.uu

  1Z3      &9U

  J'9

  auu

  0.4Д

  /.X

  are      rose     n.a     t

  3.50       ’3 75

  ’60G

  1625

  А

  8

  C

  0

  E

  F

  G

  H

  J

  К

  L 1

  1

  i W

  кМгеаше

  Ifrs

  ItaLTtae

  йигеи

  MAsre

  Mre

  Ш9М

  IWs

  WMkISOM

  Aare

  Pasol |

  L2

  J M

  teWKPWc

  u.

  %

  aS

  ■re

  EP

  Т

  (31

  CD 1

  CO 1

  CD 1

  CD 1

  CD 1

  CD.f

  CD 1

  C01   1

  5

  6.Й.1А

  ■?.a

  n.a

  ■?8

  n.a

  -a

  та

  na

  та

  -4

  | i

  iMom

  0499

  8D000

  940

  04008

  0.08

  0400

  ODO

  ODDI

  и---ьш«

  I 1

  Ама»

  ■Л

  ■a.

  ■a.

  ■a.

  •a.

  ■a.

  ■Л

  в

  A>«W№

  0408

  04800

  80C

  04000

  040

  0400

  0.00

  ODOl

  -----

  Г ii

  na

  s.a

  ns

  n.a

  na

  na

  sei

Рис. 2 Настройка расчета дрейфа в интервале 30 минут

• 2.2 Аналогично п.2.1, добавляют колонки для расчета шума с окном 20 секунд (указан интервал 1,-1,33 мин), повторяют процедуру, указанную на рис. 3 не менее 5 раз, сдвигая окно шума на 20 секунд.

Add Report Column

|||

0.0000000

Рис. 3 Настройка расчета шума с окном 20 секунд.

• 2.3 В таблице на рис. 4 даны значения дрейфа (pS/мин) и пять значений шума (pS) с окном 20 секунд.

Для получения результата модуль значения дрейфа в данном случае pS/мин переводят в pS/час (умножив на бОмин/час). Для других детекторов значения сигнала приводят в единицах, указанных в методике поверки. Для расчета шума вычисляют среднее арифметическое из 5 значений, рассчитанных для 5-ти интервалов. Значение шума выражают в единицах, указанных в МП для соответствующего детектора. При расчете шума для предела детектирования берут значения в тех единицах, в которых определяют высоту пика контрольного вещества.

&

000200

0.00000

Data Processing

A

V

kjechon list

*>

Report Designer

7^ hWrusert Method

a Injections

3 None

Nene

"] Nene

Рис. 4 Пример расчета значений дрейфа и шума