Методика поверки «Система высокоэффективной жидкостной хроматографии Waters фирмы Waters, США» (МРБ МП.1684-2007)

Система высокоэффективной жидкостной хроматографии Waters фирмы Waters, США

г. Минск

2007

• 1 Введение

• 2 Операции поверки

• 3 Средства поверки

• 4 Требования к квалификации поверителей

• 5 Требования безопасности

• 6 Условия поверки........................................................................

• 7 Подготовка к поверке

• 8 Проведение поверки.

• 9 Оформление результатов поверки

Приложение А... Методика приготовления жидких смесей контрольных веществ.....................11

Приложение Б Форма протокола поверки.

Настоящая методика распространяется на системы высокоэффективной жидкостной хроматографии Waters (далее - хроматографы) с детектором поглощения ультрафиолетового диапазона 2487 (далее - 2487), масс-спектрофотометрическим детектором Quattro Micro (далее -Quattro Micro), детектором на диодной матрице 2996 (далее - 2996), рефрактометрическим детектором 2410 (далее 2410) и флуоресцентным детектором 2475 (далее - 2475) и устанавливает методику их первичной и периодической поверок.

Межповерочный интервал 12 месяцев.

При проведении поверки должны быть выполнены операции поверки, указанные в таблице 1.

Таблица 1

Примечания

1 * При отсутствии методики выполнения измерений (МВИ) по ГОСТ

При проведении поверки должны применяться основные и вспомогательные средства, указанные в таблице 2. Таблица 2

8.010-99. 3 ** При наличии методики выполнения измерений (МВИ) по ГОСТ 8.010-99.

Если при проведении той или иной операции поверки получают отрицательный результат, дальнейшую поверку прекращают.

К проведению поверки и обработке результатов измерений допускают лиц, аттестованных в качестве поверителей в области фихико-химических измерений в порядке, установленном Госстандартом Республики Беларусь.

• 5.1 При проведении поверки должны быть соблюдены правила при работе в химических лабораториях.

• 5.2 Лица, проводящие поверку, должны быть ознакомлены с правилами (условиями) безопасной работы хроматографа и средств поверки, приведенными в их эксплуатационной документации.

При проведении поверки должны быть соблюдены следующие условия:

- механические воздействия, внешние электрические и магнитные поля, влияющие на работу хроматографа, не допускаются.

• 7 Подготовка к поверке

  • 7.1 Подготовить эталонные средства измерений к работе в соответствии с их техническим описанием или инструкцией по эксплуатации.

  • 7.2 Подготовить поверяемый хроматограф к работе в соответствии с технической документацией фирмы. Перед проведением поверочных работ хроматограф с поверяемым детектором должен пройти тестовые проверки в соответствии с документацией фирмы, входящей в комплект поставки и программным обеспечением Empower (для 2487, 2996, 2410, 2475) и MassLYNX (для Quatro-Micro).

  • 7.3 Приготовить жидкие смеси контрольных веществ в соответствием с методикой приготовления изложенной в приложении А с содержанием анализируемых компонентов согласно таблице 3,

    Антрацен

    0,1 Ml/л

    20 мкл

    HPLC grade water,

    1

    для 2475

Таблица 3

• 8 Проведение поверки

• 8.1. Внешний осмотр

При проведении внешнего осмотра должно быть установлено соответствие хроматографа следующим требованиям: четкость маркировки; отсутствие механических повреждений;

соответствие комплектности требованиям технической документации фирм - изготовителя и паспортным данным.

При опробовании проводят:

а) определение уровня флуктуационных шумов нулевого сигнала детектора, дрейфа нулевого сигнала и предела детектирования (для 2487, 2996, 2410),

б) определение Рамановского отношения сигнала к шуму ASTM для воды чистоты для ЖХ и предела детектирования (для 2475)

в) отношение сигнал/шум (для Quatro-Micro)

8.2.1 После выхода хроматографа на режим записывают в течение 1 часа нулевой сигнал на наиболее чувствительной шкале. Значение дрейфа нулевого сигнала принимают равным смещению нулевого сигнала в течение 1 часа.

Полученные значения дрейфа нулевого сигнала за 1 час не должны превышать:

для 2487 - 1 • 10 ^А е.п./ч

для 2996- 1 • 10^л3 е.п./ч

для 2410-2,5-10 ¹ ед. рефр/ч.

• 8.2.2 Уровень флуктуационных шумов нулевого сигнала (ДХ) определяют после выхода хроматографа на режим.

Полученные значения уровней шумов нулевого сигнала не должны превышать: для

2487-2,5 • 10 ~^{1 2 3 4 5 6} е.о.п для 2996- 1,5-10 ⁴ е.о.п для 2410-2,5 • 10 ⁷ ед. рефр/ч.

• 8.2.3 Значение Рамановского отношения сигнала к шуму ( S ) для воды чистоты для ЖХ (100 % HPLC grade water) определяется при скорости потока 1,0 мл/мин по формуле (1).

Уровень Рамановского тока (Н) - Уровень темнового тока (Н 0) s = -------------------------------------- ----------------------------------------------(1)

Шум AS I М

Полученное расчетное значение S должно быть не менее 800.

• 8.2.4 Отношение сигнал-шум (h/Ax) для Quattro Micro измеряют с использованием 3-х проб указанных в таблице 3.

Значение (h/Ax) должно быть не менее 20:1,

• 8.2.5 Определение предела детектирования (минимальной измеряемой концентрации контрольного вещества в стандартном режиме) выполняют при дозировании соответствующей смеси контрольного вещества. Каждая смесь дозируется не менее 6 раз.

Предел детектирования рассчитывают по формуле (2)

Полученное значение (С min ) не должно превышать:

для 2487 - 1,0-10 ~⁹ г/мл по антрацену (или ацетофенон) для 2996 - 2,0 • 10 ⁹ г/мл по антрацену

для 2475 - 1,0 • 10 ¹² г/мл по антрацену

для 2410 - 1,0-10 ⁶ г/мл по кофеину.

8.4 Определение метрологических характеристик

8.4.1 Определение относительного среднего квадратического отклонения (ОСКО) выходных сигналов хроматографа

В зависимости от наименования детектора ОСКО определяют по времени удерживания, площади и высоте пиков для чего используются материалы и комплектующие, приведенные в таблице 4.

Таблица 4

ПРИЛОЖЕНИЕ А

(рекомендуемое)

7

А.1 Растворы в диапазоне концентраций свыше 1 мг/мл приготавливают объемно-весовым методом. Массовую концентрацию определяемого компонента С о определяют по формуле

т i

С₍₎=--------------- (1)

V

где т, . масса контрольно! о компонента, мг

V - объем приготовленного раствора, мл

Исходные вещества, используемые для приготовления растворов, должны содержать не менее 99.5% основного вещества: растворители - не менее 98% основного вещества.

А.2 Температура окружающей среды при приготовлении жидких смесей должна находиться в диапазоне от 18 до 22 ⁰ С.

А..3 Мерную колбу на 100 мл взвешивают на аналитических весах ( т 1 ), вносят рассчитанное количество определяемого компонента и вновь взвешивают колбу ( т 2)/ Массу определяемого компонента (т) вычисляют по формуле

т - т 2 - tn I                ( 2 )

в колбу с определяемым компонентом вводят 20-25 мл соответствующего растворителя, перемешивают содержимое и доводят объем раствора до метки. Тщательно перемешивают раствор.

Массовую концентрацию определяемого компонента рассчитывают по формуле ( 1 ).

А.4 Растворы в диапазоне концентраций менее 1 мг/мл приготавливают объемным методом путем последовательного разбавления более концентрированных растворов. Масовая концентрация определяемого компонента в растворах определяется по формуле

С _n.i ■ v_n c_n---- (3)

100

где n - номер ступени разбавления исходного раствора смеси с концентрацией С о, v„ - аликвотная доля раствора с концентрацией С_ЛЬ/, мг/мл

Перед каждым разбавление рассчитывают значение аликвотной доли раствора уп , исходя из заданного значения концентрации определяемого компонента С п и концентрации разбавляемого раствора.

А.5 Растворы с концентрацией определяемого компонента свыше 1 мг/мл хранят 3- 5 дней в чистых сухих склянках с притертыми пробками в холодильнике. Смеси меньших концентраций используются свежеприготовленными и хранению не подлежат

Продолжение таблицы 4

Используя полученные результаты и программное обеспечение Empower (для 2487, 2996, 2410, 2475) и MassLYNX (для Quatro-Micro) вычисляют ОСКО выходных сигналов.

ОСКО рассчитывают по формуле (4)

100 \Ъ(Хср - Xi)

^ХсР \    (/1 -1)

где X \ - значение параметра выходного сигнала ( с / усл.ед./с) Значение ОСКО

выходных сигналов не должно превышать значений, приведенных в таблице 5

Таблица 5

(4)

• 8.4.2 Определение изменения выходного сигнала за 8 часов непрерывной работы После выхода хроматографа на режим дозируют три раза аттестованную смесь в соответствии с таблицей 4 в зависимости от наименования поверяемого детектора и определяют среднее арифметическое значение ( X ср ) выходного сигнала хроматографа (площадь пиков). Через 8 часов непрерывной работы снова в тех же условиях дозируют три раза смесь и определяют среднее арифметическое значение (Хср 1) выходного сигнала. Относительное изменение выходного сигнала определяют по формуле:

Y    _ Y

ер. I        ср.

5_t -------------- ■ 100                    (5 )

• 8.4.3 Определение погрешности результатов аналитических измерений.

Определение погрешности результатов аналитических измерений проводят при наличии методик выполнения измерений (МВИ), разработанных и аттестованных в установленном порядке. Условия проведения измерений и применяемые образцы для контроля должны соответствовать установленным в МВИ. Образцы (тестовые смеси с известным содержанием Сд контрольного компонента) для контроля погрешности должны удовлетворять требованиям МИ 2335-95.

На вход хроматографа подают образец для контроля и определяют в нем содержание контрольного компонента по процедуре, указанной в МВИ.

Результат' измерений содержания контрольного компонента

С должен удовлетворять условию

|C C _;i| < К                            ( 6 )

где С д . действительное значение содержания компонента,

К - норматив оперативного контроля погрешности измерения, установленный в МВИ.

• 9.1. Результаты поверки заносят в протокол, форма которого приведена в приложении Б.

• 9.2. Результаты поверки считают положительными и хроматограф признают годным к применению, если он отвечает требованиям настоящей методики. Положительные результаты поверки оформляют путем выдачи свидетельства о поверке по форме, установленной СТБ 8003-93 (приложение В).

• 9.3. При отрицательных результатах поверки выдается извещение о непригодности по форме, установленной СТБ 8003-93 (приложение Г) с указанием причин не соответствия. Хроматограф, не прошедший поверку, к применению не допускается. Предыдущее свидетельство аннулируется.

ПРИЛОЖЕНИЕ Б (рекомендуемое)

Форма протокола поверки

Протокол поверки № от"____”______________ 200 г

системы высокоэффективной жидкостной хроматографии Waters жидкостного хроматографа, тип детектора комплектующие заводской №

принадлежащего __________________________________________________________________

При поверке, проведенной _________________________________________________________

наименование предприятия, организации, проводившей поверку

по методике поверки _________________________________________

сведения о методике поверки

применялись следующие средства измерений:

• 1___________________________________________________________________________

Наименование, тип, класс точности, разряд, пределы измерений и заводской номер)

• 2___________________________________________________________________________

• 3___________________________________________________________________________

• 4___________________________________________________________________________

Условия поверки:

- температура окружающей среды,°С -

- давление, кПа (мм.рт.ст.) -

- влажность воздуха, % -

- напряжение сети, В - ;

- частота питающей сети, Гц

Результаты поверки:

1 При проведении внешнего осмотра установлено_________________________________

2 При проведении опробования установлено______________________________________

Состав аттестованной смеси____________________________________________________

уровень флуктуационных шумов_________________________________________________

дрейф нулевого сигнала___________________________________________ детектирования

4 Определение относительного среднего квадратического отклонения выходного сигнала

• 5 Определение изменения выходного сиг нала за 8 часов непрерывной работы

Выдано свидетельство № от

Поверку провел

Ф.И.О., должность

подпись

¹

АХ х G

²

С min ~~ ' ( 2 )

³

S • V

где   С mi,-, - предел детектирования, г/мл

G - масса контрольного вещества, г

⁴

- площадь под пиком, усл.ед. • с

⁵

АХ - уровень флуктуационных шумов, усл.ед.

⁶

V - скорость потока (расход) элюента, мл/с Масса контрольного вещества при использовании жидкой пробы определяется по формуле (3):

G = V-C                          ( 3)

где V - объем аттестованной смеси, мл;

⁷

С - концентрация определяемого компонента, г/мл