Методика поверки «ГСИ. Хроматографы жидкостные Flexar» (МП-242-2297-2019)

Федеральное государственное унитарное предприятие

«Всероссийский научно-исследовательский институт метрологии им. Д.И. Менделеева» ФГУП «ВНИИМ им.Д.И.Менделеева»

Государственная система обеспечения единства измерений

Хроматографы жидкостные Flexar

Методика поверки

МП-242-2297-2019

Заместитель руководителя отдела госэталнов

Старший научный сотрудник

г. Санкт-Петербург 2019

2 Настоящая методика поверки распространяется на жидкостные хроматографы Flexar со следующими типами детекторов:

сканирующий спектрофотометрический детектор (UV-Vis Detector); спектрофотометрический детектор с диодной матрицей (PDA Detector); рефрактометрический детектор (RI Detector);

флуоресцентный детектор (FL Detector)

и устанавливает методы и средства их первичной поверки после ввода в эксплуатацию и после ре-юнта и периодической поверки в процессе эксплуатации. Интервал между поверками - 1 год.

1 ОПЕРАЦИИ ПОВЕРКИ

1.1 При проведении поверки должны выполняться операции, указанные в таблице 1. Таблица 1

При наличии нормативных документов по ГОСТ 8.563-2009 на методику выполнения измерений опробование хроматографов проводят путем проверки их работоспособности в соответствии с НД на них, а определение метрологических характеристик, в соответствии с МИ 2531-99 «Анализаторы состава веществ и материалов универсальные. Общие требования к методикам поверки в условиях эксплуатации», проводится с использованием образцов для контроля (ГСО, аттестованные смеси), материалов, реактивов, вспомогательного оборудования в соответствии с требованиями НД на МВИ. При выполнении поверки с использованием МВИ, пункты, отмеченные индексом ¹ ’ в таблице 1, не выполняются.

Поверка проводится только для тех детекторов, которые установлены на поверяемом приборе или в соответствии с указанными в заявкой на поверку.

2 СРЕДСТВА ПОВЕРКИ, РЕАКТИВЫ И МАТЕРИАЛЫ

• 2.1. Основные средства поверки:

• - ГСО 7814-2000 или ГСО 7333-96 СО состава толуола или толуол (ч.д.а.) по ГОСТ 5789-78.

-ГСО 8749-2006 СО состава раствора антрацена в ацетонитриле.

• - Сахароза (ч.д.а. или х.ч.) по ГОСТ 5833-75.

• 2.2. Растворители для приготовления поверочных растворов

Ацетонитрил для жидкостной хроматографии по ТУ 6-09-14-2167-84.

Вода для лабораторного анализа (бидистиллированная или деионизированная), ГОСТ Р 652501-2005.

• 2.3. Вспомогательные средства поверки.

Колбы мерные второго класса точности с притертой пробкой по ГОСТ 1770-74.

Пипетки второго класса точности ГОСТ 29227-91.

1-канальные механические дозаторы с переменным объемом дозирования.

Весы лабораторные высокого класса точности по ГОСТ OIML R 76-1-2011.

Барометр, зарегистрированный в Федеральном информационном фонде по обеспечению единства измерений.

Термогигрометр электронный или гигрометр психометрический, зарегистрированные в Федеральном информационном фонде по обеспечению единства измерений.

Колонка для ВЭЖХ/УВЖЭХ (С-18) длинна 3-25 см, внутренний диаметр 2.1-4.6 мм, размер частиц наполнителя 1.9-5 мкм.

Допускается применение аналогичных средств поверки, обеспечивающих определение метрологических характеристик поверяемых хроматографов с требуемой точностью.

3 ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ

Требования безопасности должны соответствовать рекомендациям, изложенным в Руководстве по эксплуатации.

4 УСЛОВИЯ ПРОВЕДЕНИЯ ПОВЕРКИ

При проведении поверки соблюдают следующие условия:

• - температура окружающего воздуха, °C                           20 ± 5

• - относительная влажность воздуха, %                             Не более 80

• 5. Подготовка к поверке и требования к квалификации поверителей

5.1. Приготовить необходимый контрольный раствор, указанный в таблице 2. Методика приготовления контрольных растворов приведена в приложении А к настоящей методике поверки. Таблица 2

• 5.2. К проведению измерений по поверке допускаются лица, изучившие руководство по эксплуатации и методику поверки детектора.

Для получения данных, необходимых для поверки, допускается участие операторов, обслуживающих детектор (под контролем поверителя).

• 5.3 Поверка проводится с использование_хм одного из вышеприведенных контрольных растворов для каждого конкретного детектора (по выбору владельца).

6. ПРОВЕДЕНИЕ ПОВЕРКИ

• 6.1. Внешний осмотр

При проведении внешнего осмотра проверяют:

• - отсутствие механических повреждений;

• - соответствие комплектности прибора технической документации:

• - надежность крепления соединительных элементов.

• 6.2. Опробование

• 6.2.1. Опробование (самотестирование прибора) производится автоматически после включения питания и запуска программного обеспечения. В случае успешного прохождения опробования (тестирования) на экране монитора появляется стартовое окно программы управления прибором.

• 6.2.2. Проверка соответствия программного обеспечения

• 6.2.2.1. Проверка осуществляется следующим образом:

а) При использовании ПО TotalChrom Navigator (Workstation или Client/Server)

- в главном окне программы TotalChrom Navigator в строке команд щелкнуть мышью на команде «Help». В открывшемся окне щелкнуть мышью по строке About TotalChrom Navigator в результате чего откроется окно, в котором приведены идентификационное название ПО и номер версии. Копия экрана с возможными окнами приведена на рисунке 1.

Version 6.3.2

Copyright E 2008 PerkinElmer, Inc

PerkinElmer is a registered trademark of PerkinElmer Inc TotalChrom is a trademark of PerkinElmer. Inc

PerkinE me:

For the Better Portions Copyright 1996 The Microsoft Corporation Portions Copyright 1999 Blaise Software Services. Inc

Tidestone Formula One Copyright 1993-2000 Tidestone Technologies. Inc

T otalChrom Navigator

Veit-юп 6 3.2 0646

Close |

TotalChrom Client'Server

Version 6.3.3

Copyright © 2008-2017 PerkinElmer. Inc

PerkinElmer is a registered trademark of PerkinElmer. me TctaiCnrom is a trademark of PerkinElmer. Inc

PerkinElmer’

Fer the Better

Portions Copynght 1996 The Microsoft Corporation

Portuns Cooynght 1999 Blaise Software Services Inc

Tidestone Formula Oe Copyright 1993-2000 Tidestore Technologies inc

TotafChrorn Navigator

Vernon 6 3 30691

Close |

Рисунок 1. Окно с идентификационными данными ПО TotalChrom Navigator (Workstation или Client/server).

Детектор считается выдержавшим поверку по п. 6.2.2, если номер версии ПО - 6.3.2.0 или выше.

б) При использовании ПО Chromera

- в главном окне программы Chromera

в строке команд щелкнуть мышью на команде «Help». В открывшемся окне щелкнуть мышью по строке About Chromera в результате чего откроется окно, в котором приведены идентификационное название ПО и номер версии. Копия экрана с возможными окнами приведена на рисунке 2.

^5 Chromera

Рисунок 2 - Окно с идентификационными данными ПО Chromera.

Детектор считается выдержавшим поверку по п. 6.2.2, если номер версии ПО - 3.2.0 или выше.

• 6.2.3 Определение уровней флуктуационных шумов и дрейфа нулевого сигнала.

При опробовании проводят определение уровней флуктуационных шумов и дрейфа нулевого сигнала. Дрейф нулевого сигнала для флуоресцентного детектора (FL Detector) не определяется.

Уровень флуктуационных шумов нулевого сигнала (АХ) принимают равным амплитуде (h) повторяющихся колебаний нулевого сигнала с периодом не более 20 секунд.

За дрейф нулевого сигнала принимают наибольшее смещение уровня нулевого сигнала в течение 1 ч при регистрации сигнала без ввода пробы. Допускается регистрировать нулевой сигнал в течение 30 мин с последующей экстраполяцией до 1 ч.

Значения дрейфа нулевого сигнала (D) принимают равным смещению нулевого сигнала (Н) в течение 1 часа.

Для сканирующего спектрофотометрического детектора (UV-Vis Detector), спектрофотометрического детектора с диодной матрицей (PDA Detector), рефрактометрического детектора (RI Detector) процедура измерения шума и дрейфа осуществляется согласно приведенной в пункте 6.2.3.1 процедуре и с помощью программного обеспечения «Chromera» или «Totalchrom Navigator».

Для флуоресцентного детектора процедура измерения шума (дрейф не измеряется) осуществляется согласно приведенной в пункте 6.2.3.2 процедуре и с помощью программного обеспечения «Chromera» или «Totalchrom Navigator».

Все измерения проводятся после выхода хроматографа на режим и стабилизации параметров в течение не менее 1 часа.

• 6.2.3.1 Описание процедур измерения дрейфа и флуктуационных шумов спектрофотометрического детектора (UV-Vis Detector), спектрофотометрического детектора с диодной матрицей (PDA Detector), рефрактометрического детектора (RI Detector):

а) - заполнить измерительную ячейку (и ячейку сравнения для рефрактометрического детектора) водой.

б) - заглушить выход и вход детектора.

в) - направить элюент из насоса на слив.

г) - задать параметры метода, указанные в таблице 3.

д) - провести обнуление сигнала детектора и оставить прибор в работающем состоянии минимум на 20 минут.

е) - запустить проведение измерения с помощью программы управления хроматографом.

ж) - обработать полученный файл результата вручную или при помощи программы «Chromera» или «Totalchrom Navigator». Результат по шуму и дрейфу для спектрофотометрических детекторов приводится в единицах оптической плотности, для рефрактометрического детектора в единицах рефракции.

Таблица 3

• 6.2.3.2 Описание процедур измерения флуктуационных шумов (дрейф не нормируется) флуоресцентного детектора (FL Detector):

а) - установить поток подвижной фазы (вода) в детектор равный 1 мл/мин.

б) - установить длины волн возбуждения и эмиссии X = 280/390, провести обнуление сигнала детектора и оставить прибор в работающем состоянии минимум на 20 минут.

в) - запустить проведение измерения с помощью программы управления хроматографом. Время измерения 20 мин.

г) - обработать полученный файл результата вручную или при помощи программы «Chromera» или «Totalchrom Navigator». Результат по шуму приводится в единицах флуоресценции (FLu).

• 6.2.3.3 Полученные значения уровней флуктуационных шумов и дрейфа нулевого сигнала не должны превышать значений, приведенных в таблице 4.

Таблица 4

6.2.4 Определение предела детектирования

Предел детектирования определяют с использованием контрольных веществ и условий, указанных в таблице 5 (концентрации контрольных растворов указаны в таблице 2).

Таблица 5

* Примечание: при использовании контрольных смесей с сахарозой (рефрактометрический детектор) определение предела детектирования может проводится без ВЭЖХ колонки. Дозирующее устройство соединяется с детектором напрямую. Для стабилизации работы насоса при измерении метрологических характеристик детектора допускается использовать сопротивление (рестриктор) с противодавлением около 3500-6900 кПа.

В хроматограф вводят пробу контрольного вещества, определяют высоту и ширину пика на половине его высоты , )

Предел детектирования (г/см^?) рассчитывают по формуле:

2 • Лх • G

мин.

• - количество контрольного вещества, г;

• - скорость элюента, см³/сек;

JU.     - ширина пика на половине высоты, сек;

Дх - уровень флуктуационных шумов нулевого сигнала, определенный по п.п.6.2.3; Н      - высота пика контрольного вещества;

Н *   . - данное произведение может быть заменено площадью пика (S)

Sxu Н - измеряют в единицах, соответствующих конкретному детектору.

Полученные результаты предела детектирования не должны превышать значений, приведенных

в таблице 6.

Таблица 6

6.3 Определение метрологических характеристик

6.3.1 Определение относительного среднего квадратичного отклонения выходных сигналов.

Измерения проводят после выхода хроматографа на режим. Условия выполнения измерений должны соответствовать приведенным в разделе 6.2.4.

• 6.3.1.2 Контрольный раствор (табл.2.) вводят в хроматограф не менее 6 раз, измеряют значения выходных сигналов (площадей пиков и времен удерживания) и вычисляют их среднее арифметическое значение.

• 6.3.1.3 Относительное среднее квадратичное отклонение выходного сигнала рассчитывают по формуле:

СГ = ^-д---------- ,

где X _ значение параметра выходного сигнала (площади пика, времени удерживания), п - количество измерений.

• 6.3.1.4. Результаты испытаний по п.6.3.1 считают положительными, если значение ОСКО выходного сигнала детектора по времени удерживания и площади пика не превышают значений, указанных в таблице 7.

Таблица 7

• 6.3.2 Определение относительного изменения выходных сигналов за 4 часа непрерывной работы (по площади пика).

Условия измерения аналогичны, описанным в разделе 6.2.4. Через 4 часа непрерывной работы повторяют измерения по п.6.2.4. Контрольный образец вводится в хроматограф не менее 2 -х раз.

Относительное изменение выходного сигнала за 4 часа непрерывной работы хроматографа рассчитывают по формуле

где: X — среднее арифметическое значение выходного сигнала (площади пика) в начальный момент времени.

Xi— среднее арифметическое значение выходного сигнала (площади пика) через 4 часа.

• 6.3.2.1. Результаты испытаний по п.6.3.2 считают положительными, если значение ОСКО выходного сигнала детектора по времени удерживания и площади пика не превышают значений, указанных в таблице 8.

Таблица 8.

7. ОФОРМЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ПОВЕРКИ

• 7.1. Данные, полученные при поверке, оформляются в виде протокола, по форме установленной в организации, поводящей поверку.

• 7.2. Хроматограф, удовлетворяющий требованиям настоящей методики поверки, признается годным и на него оформляется свидетельство о поверке по установленной форме.

На оборотной стороне свидетельства приводится следующая информация:

-результаты опробования и внешнего осмотра;

-результат подтверждения соответствия ПО;

- результаты определения метрологических характеристик;

• 7.3. Хроматограф не удовлетворяющие требованиям настоящей методики, к дальнейшей эксплуатации не допускается и на него выдается извещение о непригодности.

• 7.4. Знак поверки наносится на лицевую панель хроматографа и (или) на свидетельство о поверке.

ПРИЛОЖЕНИЕ А Методика приготовления контрольных смесей

Настоящая инструкция устанавливает методику приготовления контрольных смесей, предназначенных для определения метрологических характеристик хроматографа.

Диапазон содержания контрольного компонента - от 1 * 10‘⁹ до 1*10‘² г/см³. Относительная погрешность массовой концентрации контрольного компонента не превышает 10 %.

1. Процедура приготовления контрольных смесей.

• 1.1. Контрольные смеси в диапазоне от 1 * 10’³ до 1x10’² г/см³приготавливают объемно -весовым методом. Массовую концентрацию контрольного компонента (Ci) определяют по формуле

Со= mi/V

где: mi - масса контрольного компонента, г;

V - объем приготовленной смеси, см³.

• 1.2.  Исходные вещества, используемые для приготовления контрольной смеси, выдерживают не менее 2 ч в лабораторном помещении.

• 1.3. Температура окружающей среды при приготовлении контрольных смесей не должна изменяться более, чем на 4°С.

• 1.4. Определяют массу (mi) мерной колбы вместимостью 100 мл. Результат взвешивания записывают до третьего десятичного знака.

• 1.5. В мерную колбу вносят навеску контрольного компонента и вновь взвешивают колбу (m2).

• 1.6. Вычисляют массу контрольного компонента (т) в г.

т = m2 - mi

• 1.7. В колбу с контрольным компонентом вводят от 20до 25 мл растворителя, перемешивают содержимое и доводят объем раствора до 100 мл. Тщательно перемешивают раствор.

Допускается использовать навески другой массы (но не менее 0,05г) и мерные колбы другого объема.

• 1.8. Рассчитывают массовую концентрацию контрольного компонента по п. 1.1.

• 1.9. Контрольные смеси с содержанием контрольного компонента менее 1 мг/см³ приготавливают объемным методом путем последовательного разбавления более концентрированных растворов. Массовую концентрацию контрольного компонента рассчитывают по формулам

Ci = Co^xVanl/V

C₂ = CixV^2/V

Cn ⁼ Cn-1 ^х Va.i п /V

где:      n - номер ступени разбавления исходного контрольного раствора с

концентрацией Со.

Va.ii, V ал2, Vn _п - объем аликвоты (мл) растворов с концентрацией Со, Ci,Cn-i соответственно, г/см³.

V - объем мерной колбы, используемой для разбавления

• 2.10. Перед каждым разбавлением рассчитывают значение аликвоты раствора (Vi, V2, V_n), исходя из заданного значения концентрации контрольного компонента (Со, Ci, C_n-i), концентрации разбавляемого раствора и объема мерной колбы, используемой для разбавления.

• 2.11. В мерную колбу нужного объема (объем варьируется в зависимости от степени разбавления) наливается соответствующий растворитель 1/3 - 1/2 от объема колбы. Пипеткой или механическим дозатором вносят в колбу аликвоту разбавляемого раствора, после чего доводят растворителем колбу до метки. Растворителем доводят колбу до метки и тщательно перемешивают полученный раствор.