Методика поверки «Хроматографы жидкостные моделей Prominence-i и Nexera-i» (МП 242-0319-2019)

Федеральное государственное унитарное предприятие

«Всероссийский научно-исследовательский институт метрологии нм. Д.И. Менделеева»

ФГУП «ВНИИМ им.Д.И.Менделеева

Хроматографы жидкостные моделей Prominence-i (модификации LC-2030 Plus. LC-2030C Plus. LC-2030C 3D Plus. LC-2030C LT Plus) и Nexera-i (модификации LC-2040C Plus. LC-2040C 3D Plus. LC-2040C MT Plus. LC-2040C 3D MT Plus)

МЕТОДИКА ПОВЕРКИ

МП 242-0319-2019

Заместитель руководителя отдела Государственных эталонов в области физико-химических/измеренцТ   ФГУП «ВНИИМ изй.Д.'Й.Мейделеева»

/

Ст.научный сотрудник

ФГУП «ВНИИМ им.Д.И.Менделеева»

М.А.Мешалкин

С ан кт-Петербург

2019

Настоящая методика поверки распространяется на хроматографы жидкостные моделей Prominence-i (модификации LC-2030 Plus, LC-2030C Plus, LC-2030C 3D Plus, LC-2030C LT Plus) и Nexera-i (модификации LC-2040C Plus, LC-2040C 3D Plus, LC-2040C MT Plus, LC-2040C 3D MT Plus) и устанавливает методы и средства их первичной поверки при вводе в эксплуатацию и после ремонта и периодической поверки в процессе эксплуатации.

Интервал между поверками — 1 год.

• 1. ОПЕРАЦИИ ПОВЕРКИ.

При проведении поверки выполняют операции, указанные в таблице 1. Таблица 1 - Операции поверки

Примечание:

При отсутствии НД на методику измерений, утвержденного в установленном порядке по ГОСТ Р 8.563 -2009.

²⁾При наличии НД на методику измерений.

При наличии нормативных документов по ГОСТ 8.563-2009 на методику выполнения измерений опробование хроматографов проводят путем проверки их работоспособности в соответствии с НД на них, а определение метрологических характеристик, в соответствии с МИ 2531-99 «Анализаторы состава веществ и материалов универсальные. Общие требования к методикам поверки в условиях эксплуатации», проводится с использованием образцов для контроля (ГСО, аттестованные смеси), материалов, реактивов, вспомогательного оборудования в соответствии с требованиями НД на МВИ. При выполнении поверки с использованием МВИ, пункты, отмеченные индексом ^1} в таблице 1, не выполняются.

• 2. СРЕДСТВА ПОВЕРКИ.

  • 2.1 Основные средства поверки:

• - стандартный образец состава раствора антрацена в ацетонитриле ГСО 8749-2006;

• - сахароза по ГОСТ 5833-75;

• - стандартный образец состава левомицетина ГСО 10165-2012.

• 2.2 Растворители и реактивы:

• - ацетонитрил для жидкостной хроматографии, ТУ 6-09-14-2167-84;

• - вода для лабораторного анализа высокой степени очистки, ГОСТ Р 52501-2005;

• - н-Гептан эталонный по ГОСТ 25828 или гептан для ВЭЖХ;

• - Спирт изопропиловый марки «абсолютированный» (ОКП 24 2140 0110) по ГОСТ 9805-84 или изопропанол для ВЭЖХ.

Примечание. Растворители для поверки, не имеющие марку для ВЭЖХ должны быть отфильтрованы через мембранный фильтр с диаметром пор < 0.45 мкм.

• - натрий сернокислый ХЧ, по ГОСТ 4166-76;

• 2.3 Вспомогательные средства поверки:

• - меры вместимости: пипетки 2 класса точности по ГОСТ 29227-91, колбы наливные 2 класса точности по ГОСТ 1770-74

• - весы лабораторные высокого класса точности по ГОСТ OIML R 76-1-2011.

• - термогигрометр электронный или гигрометр психрометрический, зарегистрированные в Федеральном фонде по обеспечению единства измерений (например ФИФ №22129-09; ФИФ № 69566-17 или аналогичные).

• 2.4 Колонки для высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ):

• - Luna С 18(2) (4.6 мм, средний размер частиц 5 мкм);

• - SHIM-PACK VP-ODS (4.6 мм, средний размер частиц 5 мкм);

• - SHIM-PACK GIST Cl8 (4.6 мм, средний размер частиц 5 мкм)

• - Shim Pack XR-ODS (30 мм х 3.0 мм, средний размер частиц 2.2 мкм);

• - Luna NH2 (4.6 мм, средний размер частиц 5 мкм);

• 2.5 Капилляры

• - капилляр из материала РЕЕК, внутренний диаметр 0.065 мм (из комплекта хроматографа, р/п 228-38994 по каталогу изготовителя);

• - капилляр из материала РЕЕК, внутренний диаметр 0.13 мм, длина 3000 мм (из комплекта хроматографа, р/п 222-33833-91 по каталогу изготовителя);

• - стальной капилляр, внутренний диаметр 0.1 мм (из комплекта хроматографа, р/п 228-32722-92 по каталогу изготовителя);

• - лабораторная посуда для приготовления растворов, вспомогательное оборудование;

Допускается применять аналогичные средства поверки, обеспечивающие определение метрологических характеристик поверяемых хроматографов с требуемой точностью.

По заявлению владельца хроматографа (или другого лица, представившего хроматограф на поверку), допускается проведение поверки меньшего количества детекторов из состава хроматографа с обязательным указанием в свидетельстве о поверке сведений о поверенных детекторах.

Средства измерений должны иметь действующие свидетельства о поверке, а стандартные образцы — действующие паспорта установленного образца.

• 3. ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ и КВАЛИФИКАЦИЯ ПОВЕРИТЕЛЕЙ

  • 3.1  Требования безопасности должны соответствовать рекомендациям, изложенным в Руководстве по эксплуатации хроматографов.

  • 3.2  К проведению поверки допускаются лица, имеющие техническое образование, изучившие методику поверки и прошедшие обучение на право проведения поверки по требуемому виду измерений.

  • 3.3 Для снятия данных при поверке допускается участие сервис-инженера фирмы-изготовителя или его авторизованного представителя или оператора, обслуживающего хроматограф (под контролем поверителя).

• 4. УСЛОВИЯ ПОВЕРКИ И ПОДГОТОВКА К НЕЙ.

4.1 При проведении поверки соблюдают условия, указанные в таблице 2: Таблица 2 - Условия поверки

• 4.2   Подготовительные работы выполняют в соответствии с руководством по эксплуатации хроматографов.

• 4.3   Перед проведением поверки готовят контрольные растворы (методика приготовление контрольных растворов дана в приложении А).

• 5. ПРОВЕДЕНИЕ ПОВЕРКИ

  • 5.1 Внешний осмотр.

При внешнем осмотре устанавливают:

модель системы ВЭЖХ и внешних блоков (при их наличии);

четкость маркировок;

отсутствие дефектов, которые могут повлиять на работоспособность оборудования;

Хроматографы и внешние детекторы считаются прошедшими поверку,

если они соответствуют всем перечисленным выше требованиям.

5.2 Опробование.

Хроматограф считается прошедшим опробование, если после включения питания он проходит инициализацию (внутренние тесты) и при запуске управляющего программного обеспечения соединяется с компьютером.

• 5.3 Проверка соответствия программного обеспечения.

ПО LabSolutions

Для получения информации по версии ПО LabSolutions необходимо запустить программу, авторизоваться в ней (выбрать User ID и ввести пароль), в основном меню программы (рисунок 1) выбрать пункт *'Не1р“ и в выпадающем меню выбрать пункт “About" (рисунок 1).

LaoScluticns Ма-п System Administrator)

Fite View Window Help

Online Menual... >

Ce About...

К 3  "

Postrur Bro        SPC Pottus

Show program rfoenabon verser TurberandcopjmjF*

Рисунок 1 - Основное меню программы LabSolutions.

Появится окно с идентификационными данными (рисунок 2).

Рисунок 2 - Окно с идентификационными данными ПО LabSolutions

ПО Empower

Для получения информации по версии ПО Empower необходимо запустить программу.

авторизоваться в ней (выбрать User ID и ввести пароль). В основном меню программы (рисунок 3) нажать на значок

Рисунок 3 - Основное меню программы Empower

Появится окно с идентификационными данными (рисунок 4).

Empower 3 Software

♦ CrpzrT* 2002 2016 Wrierr

Рисунок 4 - Окно с идентификационными данными ПО Empower

Встроенное ПО (ROM-версня)

Для проверки ROM-версии встроенного ПО хроматографа необходимо включить хроматограф, по окончании инициализации ввести пароль на экране хроматографа, откроется основной экран (рисунок 5). На основном экране выбрать «Menu».

Рисунок 5 - Основной экран встроенного ПО

На экране «Меню» нажать «Maintenance» (рисунок 6).

Рисунок 6 - Экран «Меню»

На экране «Maintenance» (рисунок 7) определить версию встроенного программного обеспечения.

Рисунок 7 - Экран «Maintenance».

Жидкостный хроматограф считается выдержавшим поверку, если номера версий

встроенного и управляющего ПО не ниже номера, указанного в таблице 3. Таблица 3. Идентификационные данные управляющего ПО

5.4. Определение метрологических характеристик.

При определении метрологических характеристик определяют уровень флуктуационных шумов, дрейф нулевого сигнала, отношение сигнал/шум (флуориметрический и масс-спектрометрический детекторы), относительное среднее квадратическое отклонение выходного сигнала и предел детектирования.

В зависимости от характера подвижной фазы и колонки, используемой при эксплуатации хроматографической системы выбирают для рефрактометрического детектора условия 1, 2 или 3 и для испарительного детектора светорассеивания - условия 1 или 2 (Таблица 5).

• 5.4.1 Определение уровня флуктуационных шумов и дрейфа нулевого сигнала.

При определении уровня флуктуационных шумов и дрейфа нулевого сигнала рекомендуется удалить хроматографическую колонку, установить вместо колонки капилляр из материала РЕЕК или стальной капилляр, позволяющий создать противодавление 10-20 МПа при скорости потока воды 2 мл/мин (*). Давление в системе может быть регулировано заданием температуры термостата в диапазоне (комнатная температура -10°С) - 70°С. Промыть хроматографическую систему со скоростью потока 2 мл/мин водой в течение 2-х часов. Установить капилляр из материала РЕЕК или стальной капилляр, позволяющий создать противодавление 10-20 МПа при скорости потока изопропанола 2 мл/мин (**). Давление в системе может быть регулировано заданием температуры термостата в диапазоне (комнатная температура -10°С) - 70°С. Промыть хроматографическую систему со скоростью потока 2 мл/мин изопропанолом в течение 2-х часов.

Для проведения измерений необходимо противодавление не менее 5 МПа при потоке воды со скоростью 1 мл/мин. Для этого рекомендуется использовать капилляр из набора к хроматографу с внутренним диаметром 0.065 мм.

Допускается устанавливать хроматографическую колонку, если при использовании капилляра не удается создать необходимое противодавление.

Уровень флуктуационных шумов и дрейф нулевого сигнала определяют при условиях, указанных в таблице 4 и таблице 5.

* - рекомендован стальной капилляр длиной 4000 мм и внутренним диаметром 0.1 мм; ** - рекомендован стальной капилляр длиной 2000 мм и внутренним диаметром 0.1 мм.

• 5.4.1 Л. Определение уровня флуктуационных шумов и дрейфа нулевого сигнала в программе LabSolution.

Создайте метод для проверки уровня флуктуационных шумов и дрейф нулевого сигнала согласно условиям, указанным в таблице 4 и таблице 5. После выхода хроматографа на режим (рекомендованное подготовительное время - не менее 1 часа) записывают в течение не менее 15 мин нулевой сигнал для хроматографа и для каждого внешнего детектора.

Для проведения проверки уровня флуктуационных шумов (ДХ) и дрейфа нулевого сигнала в модуле «Анализ в реальном времени. Получение данных» (Realtime Analysis. Data Acquisition) выбирают Метод (Method) —♦ Проверка параметров базовой линии (Baseline Check Parameters) (рисунок 8).

' j Анализ а реальном времени Qnrtnjm»ntl-Syit»m Administrator) - [Получение данных - Cehb.lcm)

файл

Прав»а §ид Метод Прибор Qoлучение данны» Данные Инструменты 2»но £прае«а ,*Л Параметры прибора

Проверка параметров базовой линии...

Параметры обработки данньо (Детектор А)...

Главное I ЖХ OA/QC параметры (Детектор А)...

Рисунок 8 - Модуль «Анализ в реальном времени. Получение данных».

В качестве метода расчёта шума выберите ASTM. Выберите проверяемый детектор. Задайте интервал расчёта шума и дрейфа, равный 15 минутам. Задайте максимальное время 15 минут или более для проведения оценки шума и дрейфа на продлённом временном участке базовой линии (1-16, 2-17. 3-18 минут и т.д.) в случае неудовлетворительных результатов проверки в первые 15 минут. Установите пороговые параметры проверки базовой линии согласно приложению Б. единицы, указанные в приложении Б. пересчитываются в мкВ

(рисунок 9).

Отмена       Справка

Рисунок 9 - Окно «Проверка параметров базовой линии»

Сохраните файл метода и нажмите на кнопку «Проверка базовой линии» (Baseline Check) на панели инструментов (рисунок 10).

Рисунок 10 - Кнопка «Проверка базовой линии»

Начнётся проверка базовой линии, результат проверки базовой линии отобразится на экране (рисунок 11).

Рисунок 11 - Результат проверки базовой линии

Результаты проверки базовой линии автоматически сохраняются в папке C:\LabSolution\Log\Baseline и могут быть выведены для просмотра и печати после закрытия окна автоматического отображения результатов просмотра (рисунок 11). Запись о результатах проверки автоматически осуществляется в поле «Комментарий» (Comment) (рисунок 12).

Рисунок 12 - Поле «Комментарий»

Л

Результат может быть выведен на печать в виде отчёта (рисунок 13).

Шум и дрейф нулевого сигнала

Instrument name: LC-2040C 3D+Japan Serial number: L21515510021AE

Conditions: 250 nrn. tune constant 2 sec.

Water HPLC. 1 ml-min. resistor tube.

Chromatogram

¹ '' ¹ Г ¹ ’ ^{1 1} ' I ^{1 1} ' ¹ I ^{1 1 1 1} I ^{1 1 1 1} I ^{1 1 1 1}

0.0         2.5         5.0         7.5         10.0        12.5

min

Sample Information

: BL-2040C+3D_AE.lcd

: water 1.1cm

: water 1.1cm

: PDA Chi ASTM noise

0.00-15.00min(Criteria 50.00uV).

drift 0.00-15.OOniin (Criteria 2000.00u\7h)

Pass ASTM noise : 11. IOuV. drift : 656.94uV/li : System Administrator

Рисунок 13 - Пример отчета определения шума и дрейфа нулевого сигнала

Уровень флуктуационных шумов определяют в единицах измерения детектора с дальнейшим пересчетом в единицы физических величин, приведенные в Приложении Б для соответствующего хроматографа или внешнего детектора.

Хроматограф и внешний детектор считаются выдержавшими поверку, если полученные значения уровня флуктуационных шумов и дрейфа нулевого сигнала не превышают значений, представленных в приложении Б для соответствующего хроматографа или внешнего детектора.

5.4.1.2. Определение уровня флуктуационных шумов и дрейфа нулевого сигнала в программе Empower.

Создайте метод для проверки уровня флуктуационных шумов и дрейф нулевого сигнала согласно условиям, указанным в таблице 4 и таблице 5. После выхода хроматографа на режим (рекомендованное подготовительное время - не менее 1 часа) записывают в течение не менее 15 мин нулевой сигнал для хроматографа и для каждого внешнего детектора.

Расчёт уровня флуктуационных шумов (ДХ) и дрейфа нулевого сигнала проводится следующим образом. Для полученной хроматограммы (рисунок 14)

» г -   •                    ’isttt ма-

* _J

.-У и ~ g

Рисунок 14 - Пример хрматограммы для определения уровня флуктуационных шумов и дрейфа нулевого сигнала

нажать «Processing Method» (рисунок 15).

cip

Рисунок 15 - Всплывающая надпись кнопки «Processing Method»

Открыть вкладку «Suitability» и задать расчётные параметры шума и дрейфа нулевого сигнала. Проставьте галочки для «Calculate Suitability Results» и «Calculate Suitability results for unknown peaks». Задайте параметр «Void volume». Выберите Peak to PeakNoise в для «Noise Value for s/п» (рисунок 16).

<, ►! integratton SmoctningrCmset; Components: impurity Peak Rattos CMS Ion Ratos) ■ Default AmountsrPurtfr Named Groups Timed Groups SudaMMy Limits Noise and Dnft

Catenate SutfaMty Result

Calculate Surtabity ReaJh tor Unknown Peak t System and S epar abort ЕЖсспсу Vnd Volume Tme|nwi| jl300

US Phamacopoeu         European Phdmeccpoem

J «arete Pharmacopoeia • Al

Tangsrt Percert lor USP fiescAAon ;50

Tangent Percert lot USPPlate Cool [61

Г Calcti^eUSP EP anjJPi/n

Г

n ГЗ

Noee Value tor i/n   |Pea* ioPe*Norse •

Bateine None and Orb MeauesierIt

Maemum ДкжаЫе None               Mstrrun Alowabie Orb

XRtmTimeOveWhichloAverage 50

Г CafcOate Peak. StataUcal M-mert.

Рисунок 16 - Вкладка «Suitability»

Во вкладке «Noise and Drift» задать временные параметры для расчёта шума и дрейфа нулевого сигнала. Выбирается участок хроматограммы длинной не менее 15 минут. В качестве сегмента деления задайте 30 с (рисунок 17).

□з Erie ЕЛ» View Toots Plot Process Navigate Options Window Help

8    *       -J _U.                 -I ' Ж131Я1ЛГ1 ~|Ч|е|

jgJAd nijzJ______________________________________________________

’ • ntegration SmootningiOffsel Components Impurity Peak Rabos (MS Ion Ratios)^ DefaultAmountslPunty Named Groups [Timed Groups Suitability Limits Noise and Ml

None and Dr* Parameter:

CaKuUta Detects None and Dr*

Start Tine |mm) 2 000

Stop Tme      ¹⁷ 000

Segment Wrtth liecl :ЁГ

Рисунок 17 - Вкладка «Noise and Drift»

Нажмите кнопку «Integrate» (рисунок 18).

> Plot Process Navigate Options Wine

Рисунок 18 - Всплывающая надпись кнопки «Integrate»

Нажмите кнопку «Results» (рисунок 19).

—

Рисунок 19 Всплывающая надпись кнопки «Results»

Отобразите результат расчёта шума и дрейфа нулевого сигнала, добавив колонки «Detector Drift», «Peak to Peak Noise». «Det. Units» в таблицу результатов. Задайте степенное отображение результатов в колонках (рисунок 20).

= file Edit View Tools Plot Process Navigate Options Window Help

_i_J J ail • И n_J___J I I              W

< I ► |\ Peaks Г

Рисунок 20 - Пример отображения результатов расчёта шума и дрейфа нулевого сигнала

Результат расчёта уровня флуктуационных шумов (АХ) и дрейфа нулевого сигнала может быть выведен на печать в виде отчёта (рисунок 21).

Sample Name: SampleT\pe: Mai:

Injection# IniectionMjIume:

Axiuired By Sanpl e Set Name: Ад. Method Set: Rocessina Method: Channel Name:

noise Unknown

1:19

Colurm Name

Date Rocessed:

Column Serial Number

Peak Results

Рисунок 21 - Пример отчета определения шума и дрейфа нулевого сигнала

Уровень флуктуационных шумов определяют в единицах измерения детектора с дальнейшим пересчётом в единицы физических величин, приведенные в Приложении Б для соответствующего хроматографа или внешнего детектора.

Хроматограф и внешний детектор считаются выдержавшими поверку, если полученные значения уровня флуктуационных шумов и дрейфа нулевого сигнала не превышают значений, представленных в приложении Б для соответствующего хроматографа или внешнего детектора.

• 5.4.2 Определение относительного среднего квадратического отклонения (ОСКО, %) параметров выходных сигналов.

Определение проводят на хроматографе, хроматографе с внешним детектором, укомплектованном хроматографической колонкой в условиях, указанных в таблице 4 и таблице 5. Контрольный раствор вводят в хроматограф не менее 6 раз, измеряют параметры выходных сигналов (время удерживания и площадь пиков). Для каждого параметра вычисляют среднее арифметическое значение X.

Относительное среднее квадратическое отклонение (ОСКО (%)) параметров выходного сигнала рассчитывают по формуле 1 с помощью программного обеспечения:

Xi = i-oe значение параметра выходного сигнала (временя удерживания, площадь пика) N - количество измерений.

Хроматограф и внешний детектор считаются выдержавшими поверку, если значения относительного среднего квадратического отклонения параметров выходного сигнала не превышают значений, указанных в приложении Б.

• 5.4.3 Определение предела детектирования.

Для определения предела детектирования используют значение X, полученное в разделе 5.4.2 для площади выходного сигнала и значение ДХ, полученное в разделе 5.4.1 для уровня флуктуационных шумов.

Предел детектирования в г/см рассчитывают по формуле 2:

где

ДХ - уровень флуктуационных шумов;

V - скорость элюента, см³/мин;

G - количество контрольного вещества в граммах, G = 10'⁹хСхУ_ДОз;

С - массовая концентрация контрольного вещества в мг/дм³;

Vдоз - объём вводимой пробы контрольного вещества, мкл;

X и ДХ измеряют в мкВ, мкВ*с, либо в единицах, указанных в Приложении Б

Хроматограф и внешний детектор считаются выдержавшими поверку, если полученные значения предела детектирования не превышают значений, указанных в Приложении Б.

• 5.4.4 Определение отношения сигнал-шум.

5.4.4.1 Определение отношения сигнал-шум флуориметрического детектора по Рамановскому спектру дистиллированной воды

Рамановский спектр воды дистиллированной воды (рисунок 22) регистрируют в соответствии с руководством по эксплуатации флуориметрического детектора (раздел 7.5.6 «Проверка характеристик по Рамановскому спектру воды» (Inspecting a Performance Using the Raman Spectrum of Water)).

Рисунок 22 - Вид Рамановского спектра воды

Отношение сигнал-шум (S/N) рассчитывают автоматически с помощью программного обеспечения по алгоритму, представленному на рисунке 23.

N

15-мин. хроматограмма делится на 30 участков по 30 секунд

ю

V

Шум = -4^1.

30

Рисунок 23 - Алгоритм расчета отношения сигнал-шум

Результат выводится на экран детектора (рисунок 24).

temp.cnt. prog.run remote

Рисунок 24 - Пример результата определения отношения сигнал-шум (S/N)

Детектор считается прошедшим операцию поверки, если полученная величина отношения сигнал-шум не менее значений, указанных в Приложении Б.

5.4.4.2 Определение отношения сигнал-шум масс-спектрометрического детектора LCMS-2020.

Определение проводят с использованием программного обеспечения, управляющего хроматографической системой по хроматограмме, полученной в условиях таблицы 4 с применением стандартного сглаживания (Standard, counts: 2. width: 3 с). Для расчёта шума выбирается гладкий участок хроматограммы длинной не менее 30 с. Допускается использовать конечный 30-секундный участок хроматограммы. В качестве метода расчёта шума выбирается метод RMS. Пример хроматограммы приведен на рисунке 25.

SIM 321,00 m/z, Event time 0,5 sec, Nebnlazing gas 1 L/min

Drying Gas 10 L/min

Interface temp 350 C

DL temp 300 C

Heat block temp 400 C

0,1% HCOOH in Water/MeCN 7/3,0.5 ml/min Shim Pack XR-ODS 2.2um 3.0x30mm

левомицетина ГСО 10165-2012

Детектор считается прошедшим операцию поверки, если полученная величина отношения сигнал-шум не менее значения, указанного в Приложении Б.

5.4.4 Определение относительного изменения выходного сигнала за 4 часа непрерывной работы.

Через 4 часа после определения относительного среднего квадратического отклонения (ОСКО (%)) выходных сигналов повторяют данные измерения в соответствии с разделом 5.4.2. Проводят определение среднего значения площади выходного сигнала через 4 часа (X_t). Относительное изменение выходного сигнала за 4 часа непрерывной работы хроматографа рассчитывают по формуле 3:

Значения относительного изменения выходного сигнала за 4 часа непрерывной работы хроматографа не должны превышать значений, указанных в приложении В.

5.5 При проведении периодической поверки хроматографов, эксплуатируемых по НД на методики, отвечающим требованиям ГОСТ Р 8.563-2009, проверяют показатели точности результатов измерений в соответствии с процедурами и нормативами контроля, регламентированными в методике измерений.

6. ОФОРМЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ПОВЕРКИ.

• 6.1. Данные, полученные при поверке, оформляются в виде протокола, по форме установленной в организации, проводящей поверку.

• 6.2. Хроматограф, удовлетворяющий требованиям настоящей методики поверки, признается годным и на него оформляется свидетельство о поверке по установленной форме.

На оборотной стороне свидетельства приводится следующая информация: -результаты опробования и внешнего осмотра;

-результат подтверждения соответствия ПО;

- результаты определения метрологических характеристик;

• 6.3. Хроматограф не удовлетворяющие требованиям настоящей методики, к дальнейшей эксплуатации не допускается и на него выдается извещение о непригодности.

• 6.4. Знак поверки наносится на лицевую панель хроматографа и (или) на свидетельство о поверке.

Таблица 4. Условия определения метрологических характеристик хроматографов моделей Prominence-i и Nexera-i

* - например, Luna С18(2), SHIM-PACK VP-ODS, SHIM-PACK GIST С18.

** - допускается использовать иную скорость потока при определении ОСКО (%), если выбранная для поверки хроматографическая колонка не предназначена

для использования при скорости 1 мл/мин.

*** - Для диодно-матричных детекторов хроматограмма записывается в координатах время - оптическая плотность (Б).

Таблица 5. Условия определения метрологических характеристик внешних детекторов.

ПРИЛОЖЕНИЕ А

МЕТОДИКА ПРИГОТОВЛЕНИЯ КОНТРОЛЬНЫХ РАСТВОРОВ.

Методика предназначена для приготовления контрольных растворов антрацена, сахарозы, левомицетина. При проведении работ по приготовлению растворов рекомендуется работать в защитных перчатках. Рекомендуется проводить работы в вытяжном шкафу. При приготовлении растворов применяются основные формулы:

г ^р-ра

Ср-ра - концентрация приготавливаемого раствора;

Сисх - концентрация раствора, используемого в качестве исходного;

Vаликвоты — точный объём исходного раствора;

Уколбы - объём приготавливаемого раствора;

m = масса навески.

СРЕДСТВА ИЗМЕРЕНИЙ, ПОСУДА, РЕАКТИВЫ.

• 1.  ГСО 8749-2006 состава антрацена в ацетонитриле, массовая концентрация антрацена 0,200 мг/см³.

• 2. Сахароза, ГОСТ 5833-75.

• 3. ГСО 10165-2012 состава левомицетина.

• 4. Весы лабораторные высокого класса точности, ГОСТ OIML R 76-1-2011;

• 5. Пипетки градуированные 1-1-2-1,1-1-2-2,1-1-2-10, ГОСТ 29227-91;

• 6. Колбы мерные 2-10-2,2-100-2, ГОСТ 1770-74;

• 7. Дозаторы постоянного объема вместимостью 1 и 2 мл с погрешностью не более ±0,3 %.

• 8. Ультразвуковая баня для растворения сухих веществ;

• 9. Виала 10 мл с завинчивающейся крышкой;

• 10. Виала 4 мл с завинчивающейся крышкой;

• 11. Виал 1.5 мл с завинчивающейся крышкой и септой;

• 12. Двухкомпонентный медицинский шприц на 2-2.5 мл;

• 13. Стакан химический вместимость 50 мл;

• 14. Сульфат натрия безводный в качестве осушителя (ХЧ или ОСЧ);

• 15. Одноразовый мембранный диск-фильтр с диаметром пор не более 0.45 мкм, подходящий для фильтрации растворов ацетонитрила, гептана, воды;

2. ПРОЦЕДУРА ПРИГОТОВЛЕНИЯ.

2.1    Приготовление раствора с массовой концентрацией антрацена в ацетонитриле 1 мг/л.

Пипеткой или дозатором вместимостью 1 см³ переносят 1 см³ ГСО антрацена в ацетонитриле в мерную колбу вместимостью 10 см³ и доводят содержимое колбы до метки ацетонитрилом, закрывают пробкой и перемешивают (раствор 1, 20 мг/л). Полученный раствор переливают в виалу на 10 мл с завинчивающейся крышкой и хранят в холодильнике. Срок хранения раствора 1-3 месяца. Пипеткой или дозатором вместимостью 1 см³ переносят 1 см³ раствора 1 в мерную колбу вместимостью 10 см³ и доводят содержимое колбы до метки ацетонитрилом, закрывают пробкой и перемешивают (раствор 2, 2 мг/л). Полученный раствор переливают в виалу на 10 мл с завинчивающейся крышкой и хранят в холодильнике. Срок хранения раствора 2-1 месяц. В виалу на 4 мл с завинчивающейся крышкой пипеткой или дозатором вместимостью 1 см³ прибавляют 1 см³ раствора 2 к 1 мл подвижной фазы состава MeCN/НгО -   4/1, используемой для определения ОСКО (%)

спектрофотометрического, диодно-матричного или флуориметрического детектора. Рекомендуется использовать подвижную фазу, собранную из выходного сливного капилляра спектрофотометрического, диодно-матричного или флуориметрического детектор после выхода на рабочий режим поверяемой хроматографической системы. Срок хранения раствора 3 в холодильнике - 1 неделя. Перед вводом в хроматограф необходимое количество раствора переносят в виалу на 1.5 мл с завинчивающейся крышкой и септой.

2.2   Приготовление раствора с массовой концентрацией антрацена в ацетонитриле 100 мг/л.

В виалу на 4 мл с завинчивающейся крышкой пипеткой или дозатором вместимостью 1 см³ прибавляют 1 см³ ГСО антрацена в ацетонитриле к 1 мл подвижной фазы состава MeCN/НгО - 4/1, используемой для определения ОСКО (%) рефрактометрического детектора или испарительного детектора светорассеивания. Рекомендуется использовать подвижную фазу, собранную из выходного сливного капилляра рефрактометрического детектора после выхода на рабочий режим поверяемой хроматографической системы. Для испарительного детектора светорассеивания рекомендуется использовать подвижную фазу, собранную из входного капилляра детектора. Срок хранения в холодильнике - 1 месяц. Перед вводом в хроматограф необходимое количество раствора переносят в виалу на 1.5 мл с завинчивающейся крышкой и септой.

• 2.2 Приготовление раствора с массовой концентрацией антрацена в гептане 100 мг/л.

Способ 1.

Пипеткой или дозатором вместимостью 1 см³ переносят 1 см³ ГСО антрацена в ацетонитриле виалу на 10 мл с завинчивающейся крышкой. К данному раствору пипеткой или дозатором вместимостью 2 см³ прибавляю 2 см³ гептана. Виалу закрывают завинчивающейся крышкой и тщательно перемешивают содержимое интенсивными встряхиваниями не менее 10 минут. К полученной эмульсии прибавляют 5 см³ воды для ВЭЖХ, виалу закрывают завинчивающейся крышкой и тщательно перемешивают содержимое интенсивными встряхиваниями не менее 10 минут. После прекращения встряхивания эмульсию оставляют на 5-10 минут до полного расслоения. Крышку открывают и аккуратно отбирают 1.8-1.9 см³ верхней гептановой фазы двухкомпонентным медицинским шприцом на 2-2.5 мл отбирают через иглу и переносят виалу на 10 мл с завинчивающейся крышкой. К данному раствору прибавляют 5 см³ воды для ВЭЖХ, виалу закрывают завинчивающейся крышкой и тщательно перемешивают содержимое интенсивными встряхиваниями не менее 10 минут. После прекращения встряхивания эмульсию оставляют на 5-10 минут до полного расслоения. Крышку открывают и аккуратно отбирают 1.6-1.7 см³ верхней гептановой фазы двухкомпонентным медицинским шприцом на 2-2.5 мл отбирают через иглу и переносят в виалу на 4 мл с завинчивающейся крышкой. К полученному раствору прибавляют 100 мг безводного Na2SC>4. Виалу закрывают завинчивающейся крышкой и тщательно перемешивают содержимое интенсивными встряхиваниями не менее 3 минут. Визуально оценивают получившуюся суспензию. Если суспензии не осталось свободно пересыпающихся кристаллов осушителя, то требуется добавить ещё 50-100 мг осушителя и повторить процедуру встряхивания. Если часть осушителя свободно пересыпается после встряхивания, то дополнительный осушитель добавлять нет необходимости. Рекомендуется после перемешивания оставить раствор на 1 час для максимального удаления растворённой в гептане воды. Допускается оставить раствор с осушителем на 12 часов (на ночь). Виалу открывают и двухкомпонентным медицинским шприцом на 2-2.5 мл отбирают через иглу весь раствор антрацена в гептане. Полученный раствор отфильтровывают через одноразовый мембранный диск-фильтр с диаметром пор не более 0.45 мкм в виалу на 1.5 мл с завинчивающейся крышкой и септой. Рекомендуется использовать насадочный диск-фильтр малого диаметра - 10-20 мм. Срок хранения раствора в холодильнике -1 неделя.

Способ 2.

Пипеткой вместимостью 1 см³ переносят 1 см³ ГСО антрацена в ацетонитриле виалу с завинчивающейся крышкой на 4 мл и упаривают досуха в токе воздуха, азота, аргона, гелия. Допускается оставить открытую виалку с раствором вытяжном шкафу до полного улетучивания растворителя. Пипеткой вместимостью 2 см³ переносят 2 см³ н-гептана в виалу с сухим остатком. Рекомендуется использовать подвижную фазу (гептан), собранную из выходного сливного капилляра рефрактометрического детектора после выхода на рабочий режим поверяемой хроматографической системы Виалу закручивают крышкой и перемешивают встряхиванием до полного растворения сухого вещества. Рекомендуется использовать для растворения ультразвуковую баню. Срок хранения раствора в холодильнике - 1 неделя. Перед вводом в хроматограф необходимое количество раствора переносят в виалу на 1.5 мл с завинчивающейся крышкой и септой.

• 2.3   Приготовление раствора с массовой концентрацией сахарозы в воде 200 мг/л.

Приготовление раствора с массовой концентрацией сахарозы в воде 200 мг/л.

Взвешивают в стакане (200±2) мг сахарозы, добавляют в стакан 25 мл воды для ВЭЖХ, перемешивают до полного растворения сахарозы. Рекомендуется использовать для растворения ультразвуковую баню. Полученный раствор переносят в мерную колбу вместимостью 100 см³. Ополаскивают стакан водой, переносят ее в мерную колбу, доводят до метки водой, закрывают пробкой и перемешивают (раствор 1, 2000 мг/л). Срок хранения раствора в холодильнике -1 месяц. Пипеткой вместимостью 10 см³ переносят 10 см³ раствора 1 в мерную колбу на 100 см³, доводят содержимое колбы до метки водой, закрывают пробкой и перемешивают (раствор 2, 200 мг/л). Срок хранения раствора в холодильнике - 1 неделя. Необходимое количество полученного раствора 2 отфильтровывают через одноразовый мембранный диск-фильтр с диаметром пор не менее 0.45 мкм в виалу на 1.5 мл с завинчивающейся крышкой и септой перед вводом в хроматограф. Срок хранения раствора в холодильнике -1 неделя.

• 2.4   Приготовление раствора с массовой концентрацией левомицетина в ацетонитриле 10 пкг/мкл.

2.4.1  Приготовление раствора с массовой концентрацией левомицетина в ацетонитриле 100 мг/л (раствор 1).

В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают навеску левомицетина (10±0.1) мг левомицетина, доводят до метки ацетонитрилом, закрывают пробкой и перемешивают. Срок хранения раствора в холодильнике - 1 месяц.

2.4.2  Приготовление раствора с массовой концентрацией левомицетина в ацетонитриле 1 мг/л (раствор 2).

Пипеткой или дозатором вместимостью 1 см³ переносят 1 см³ раствора 1 в мерную колбу на 100 см³, доводят содержимое колбы до метки до метки ацетонитрилом, закрывают пробкой и перемешивают. Срок хранения раствора в холодильнике - 1 неделя.

2.4.3  Приготовление раствора с массовой концентрацией левомицетина в ацетонитриле 10 пк/мкл (раствор 3) -10 мкг/л.

Пипеткой или дозатором вместимостью 1 см³ переносят 1 см³ раствора 2 в мерную колбу на 100 см³, доводят содержимое колбы до метки до метки ацетонитрилом, закрывают пробкой и перемешивают. Необходимое количество полученного раствора отфильтровывают через одноразовый мембранный диск-фильтр с диаметром пор не более 0.45 мкм в виалу на

• 1.5 мл с завинчивающейся крышкой и септой перед вводом в хроматограф. Срок хранения раствора в холодильнике - 1 сутки.

ПРИЛОЖЕНИЕ Б Метрологические характеристики хроматографов моделей Prominence-i и Nexera-i и внешних детекторов.

Таблица 1. Уровень флуктуационных шумов, дрейф нулевого сигнала и предел детектирования

1 Б (Бэлл) численно равен 1 В (Вольт).

Для пересчёта результата тестирования из мкВ в ед. рефр. при использовании шкалы чувствительности 1.0E-3(RIU/V) следует умножить полученное значение на 10’⁹, при использовании шкалы чувствительности 1.0E-4(RIU/V) - на 1О'¹⁰.

Таблица 2. Относительное среднее квадратическое отклонение и относительное изменение выходного сигнала за 4 часа непрерывной работы

¹

- например, Luna С18(2), SHIM-PACK VP-ODS или SHIM-PACK GIST C18.

²

- например NH2, рекомендуется провести кондиционирование колонки в течение 4 часов перед проведением сбора данных.

³

- например Shim Pack XR-ODS.

⁴¹ - допускается использовать иную скорость потока при определении СКО (%), если выбранная для поверки хроматографическая колонка не предназначена для использования при скорости 1 мл/мин.

⁵¹ - Для диодно-матричных детекторов хроматограмма записывается в координатах время - оптическая плотность (Б).