лист № 1

всего листов 5

Приложение к свидетельству № 2219 об утверждении типа стандартного образца

ДОКУМЕНТЫ, устанавливающие требования к метрологическим и техническим характеристикам и выпуску из производства: техническое задание на разработку стандартного образца фрагмента плазмиды pUC18 длиной 271 нуклеотид; программа испытаний стандартного образца фрагмента плазмиды pUC18 длиной 271 нуклеотид в целях утверждения типа.

Периодичность актуализации технической документации на тип стандартного образца - один раз в пять лет.

ФОРМА ВЫПУСКА: единичное производство.

НОМЕР ЭКЗЕМПЛЯРА (ПАРТИИ), ДАТА ВЫПУСКА: №001, дата выпуска 30 июня 2011 г.

НАЗНАЧЕНИЕ: поверка и калибровка автоматических секвенаторов, а также контроль метрологических характеристик при проведении их испытаний, в том числе с целью утверждения типа.

• - сфера государственного регулирования: осуществление деятельности в области здравоохранения, осуществление ветеринарной деятельности, осуществление деятельности в области охраны окружающей среды, выполнение работ по оценке соответствия промышленной продукции и продукции других видов, а также иных объектов установленным законодательством Российской Федерации обязательным требованиям, осуществлении мероприятий государственного контроля (надзора);

• -  область применения: здравоохранение, ветеринария, охрана окружающей среды, сельскохозяйственная и промышленная биотехнология, научно-исследовательская деятельность.

ДОКУМЕНТЫ, определяющие применение:

ОПИСАНИЕ: Стандартный образец представляет собой известную четко определенную последовательность ДНК. С химической точки зрения ДНК — это длинная полимерная молекула, состоящая из повторяющихся блоков — нуклеотидов («букв» генетического кода). Химически возможно четыре различных нуклеотида (аденин, тимин, гуанин и цитозин), обозначающиеся соответственно буквами: A, T, G и C. Получение стандартного образца основано на последовательности ферментативных химических реакций, модифицирующих («вырезающих» необходимый фрагмент) известную последовательность ДНК плазмиды pUC18. Основными метрологическими характеристиками стандартного образца являются:

• - последовательность нуклеотидов (A, T, G и С)

Приложение к свидетельству № 2219 лист № 2 об утверждении типа стандартного образца всего листов 5 (обязательное)

- количество нуклеотидов (длина последовательности стандартного образца).

Последовательность ДНК состоит из двух комплементарных цепочек. Комплементарность -одно из основных свойств цепочек ДНК (последовательности «букв»). Оно проявляется в том, что к каждому нуклеотиду прямой последовательности (A, T, G или C) присоединяется комплементарный нуклеотид обратной последовательности по закону (AoT, GoC). Данная комплементарная последовательность образует вторую (обратную) цепочку. При этом комплементарная цепочка записывается с противоположного конца из-за химического строения молекулы ДНК (например, к цепочке AACTGT комплементарная будет записана в виде ACAGTT).

Стандартный образец представляет собой фрагмент плазмиды pUC18 (Yanisch-Perron, C., et al., Improved M13 phage cloning vectors and host strains: nucleotide sequences of the M13mp18 and pUC19 vectors, Gene, 33, 103-119, 1985.), длина которой составляет 2686 нуклеотидов (как в прямой так и в комплементарной цепочках). Нуклеотидная последовательность (прямая и комплементарная) плазмиды pUC18 имеет следующий вид (Последовательность стандартного образца выделена серым цветом):

1 CTATGCGGCA TCAGAGCAGA TTGTACTGAG AGTGCACCAT ATGCGGTGTG AAATACCGCA

GATACGCCGT AGTCTCGTCT AACATGACTC TCACGTGGTA TACGCCACAC TTTATGGCGT

CAGATGCGTA AGGAGAAAAT ACCGCATCAG GCGCCATTCG CCATTCAGGC TGCGCAACTG GTCTACGCAT TCCTCTTTTA TGGCGTAGTC CGCGGTAAGC GGTAAGTCCG ACGCGTTGAC

TTGGGAAGGG CGATCGGTGC GGGCCTCTTC GCTATTACGC CAGCTGGCGA AAGGGGGATG

AACCCTTCCC GCTAGCCACG CCCGGAGAAG CGATAATGCG GTCGACCGCT TTCCCCCTAC

TGCTGCAAGG CGATTAAGTT GGGTAACGCC AGGGTTTTCC CAGTCACGAC GTTGTAAAAC

ACGACGTTCC GCTAATTCAA CCCATTGCGG TCCCAAAAGG GTCAGTGCTG CAACATTTTG

GACGGCCAGT GCCAAGCTTG CATGCCTGCA GGTCGACTCT AGAGGATCCC CGGGTACCGA

CTGCCGGTCA CGGTTCGAAC GTACGGACGT CCAGCTGAGA TCTCCTAGGG GCCCATGGCT

961 CCAAGCTGGG CTGTGTGCAC GAACCCCCCG TTCAGCCCGA CCGCTGCGCC TTATCCGGTA

Приложение к свидетельству № 2219 об утверждении типа стандартного образца (обязательное)

Приложение к свидетельству № 2219                                                     лист № 4

об утверждении типа стандартного образца всего листов 5

В качестве стандартного образца используется фрагмент длиной 271 нуклеотид, полученный в результате обработки плазмиды pUC18 ферментом рестрикции RsaI. Рестриктаза - бактериальный фермент, распознающий специфическую последовательность в двухцепочечной ДНК длиной 4 - 6 нуклеотидов и расщепляющий непрерывную двухцепочечную ДНК именно в этом участке. Карта, показывающая, где кольцевая цепочка ДНК расщепляется ферментом Rsa I, представлена на рис. 1. Стандартный образец представляет собой фрагмент, отмеченный на рис. 1 сплошным синим цветом. Его длина составляет 271 нуклеотид в каждой из двух комплементарных цепочек. Объем водного раствора стандартного образца составляет 200 мкл.

Рисунок 1. Рестрикционная карта фермента RsaI плазмиды pUC18.

Аттестуемые характеристики:

• 1. Концентрация ДНК в водном растворе

• 2. Последовательность нуклеотидов стандартного образца (прямая и комплементарная);

• 3. Количество нуклеотидов в последовательности стандартного образца

Приложение к свидетельству № 2219 об утверждении типа стандартного образца (обязательное)

Нормированные метрологические характеристики:

• 1. Концентрация ДНК в водном растворе (Таблица 1)

Т а б л и ц а 1 - Нормированные метрологические характеристики

• 2. Последовательность нуклеотидов стандартного образца (прямая последовательность выделена серым цветом, обратная последовательность - без выделений):

1 ACTGAGAGTG CACCATATGC GGTGTGAAAT ACCGCACAGA TGCGTAAGGA GAAAATACCG

TGACTCTCAC GTGGTATACG CCACACTTTA TGGCGTGTCT ACGCATTCCT CTTTTATGGC

61 CATCAGGCGC CATTCGCCAT TCAGGCTGCG CAACTGTTGG GAAGGGCGAT CGGTGCGGGC

GTAGTCCGCG GTAAGCGGTA AGTCCGACGC GTTGACAACC CTTCCCGCTA GCCACGCCCG

121 CTCTTCGCTA TTACGCCAGC TGGCGAAAGG GGGATGTGCT GCAAGGCGAT TAAGTTGGGT

GAGAAGCGAT AATGCGGTCG ACCGCTTTCC CCCTACACGA CGTTCCGCTA ATTCAACCCA

181 AACGCCAGGG TTTTCCCAGT CACGACGTTG TAAAACGACG GCCAGTGCCA AGCTTGCATG

TTGCGGTCCC AAAAGGGTCA GTGCTGCAAC ATTTTGCTGC CGGTCACGGT TCGAACGTAC 241 CCTGCAGGTC GACTCTAGAG GATCCCCGGG T

GGACGTCCAG CTGAGATCTC CTAGGGGCCC A

• 3. Последовательность пар нуклеотидов стандартного образца включает 271 единицу.

СРОК ГОДНОСТИ ЭКЗЕМПЛЯРА: 5 лет при -20°С

Место и способ нанесения знака утверждения типа на сопроводительные документы стандартного образца: печатным способом в правом верхнем углу первого листа паспорта и этикетки.

РАЗРАБОТЧИК: - Учреждение Российской академии наук Центр «Биоинженерия» РАН 117312 Россия, Москва, пр-т 60-летия Октября д.7, корп.1.

ИЗГОТОВИТЕЛЬ: - Учреждение Российской академии наук Центр «Биоинженерия» РАН 117312 Россия, Москва, пр-т 60-летия Октября д.7, корп.1.

Заместитель Руководителя Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

М.п. «___» _______________2011 г.