Номер по Госреестру СО: ГСО 9931-2011
СО ФРАГМЕНТА ПЛАЗМИДЫ рUC18 ДЛИНОЙ 271 НУКЛЕОТИД
СО представляет собой известную четко определенную последовательность ДНК. С химической точки зрения ДНК - это длинная полимерная молекула, состоящая из повторяющихся блоков - нуклеотидов ("букв" генетического кода). Химически возможно четыре различных нуклеотида (аденин, тимин, гуанин и цитозин), обозначающиеся соответственно буквами: А, Т, G и С. Получение стандартного образца основано на последовательности ферментативных химических реакций, модифицирующих ("вырезающих" необходимый фрагмент) известную последовательность ДНК плазмиды рUC18. Основными метрологическими характеристиками стандартного образца являются: - последовательность нуклеотидов (А, Т, G и С); - количество нуклеотидов (длина последовательности стандартного образца). Последовательность ДНК состоит из двух комплементарных цепочек. Комплементарность - одно из основных свойств цепочек ДНК (последовательности "букв"). Оно проявляется в том, что к каждому нуклеотиду прямой последовательности (А, Т, G и С) присоединяется комплементарный нуклеотид обратной последовательности по закону (А-Т, G-С). Данная комплементарная последовательность образует вторую (обратную) цепочку. При этом комплементарная цепочка записывается с противоположного конца из-за химического строения молекулы ДНК (например, к цепочке AACTGT комплементарная будет записана в виде ACAGTT). СО представляет собой фрагмент плазмиды рUC18 (Yanisch-Perron, C., et al., Improved M13 phage cloning vectors and host strains: nucleotide sequences of the M13mp18 and pUC19 vectors, Gene, 33, 103-119, 1985), длина которой составляет 2686 нуклеотидов (как в прямой так и в комплементарной цепочках). В качестве СО используется фрагмент длиной 271 нуклеотид, полученный в результате обработки плазмиды рUC18 ферментом рестрикции Rsal. Рестриктаза - бактериальный фермент, распознающий специфическую последовательность в двухцепочечной ДНК длиной 4-6 нуклеотидов и расщепляющий непрерывную двухцепочечную ДНК именно в этом участке. Объем водного раствора СО составляет 200 мкл.
СРОК ГОДНОСТИ: 5 лет при (- 20) град. Цельсия
СРОК СВИДЕТЕЛЬСТВА: 01.07.2016
НОМЕР ЗАПИСИ: 1143
ДАТА ОПУБЛИКОВАНИЯ: 18.05.2018
ПРОИЗВОДИТЕЛЬ: Учреждение РАН Центр "Биоинженерия" РАН
СТРАНА: Россия
НАИМЕНОВАНИЕ АТТЕСТОВАННОЙ ХАРАКТЕРИСТИКИ
- концентрация ДНК в водном растворе, нг/мкл; последовательность нуклеотидов СО ; количество нуклеотидов в последовательности СО: последовательность пар нуклеотидов СО включает 271 единицуСПОСОБ УСТАНОВЛЕНИЯ АТТЕСТОВАННОГО ЗНАЧЕНИЯ
- Применение аттестованных методик измеренийОписание стандартного образца
Стандартный образец представляет собой известную четко определенную последовательность ДНК. С химической точки зрения ДНК — это длинная полимерная молекула, состоящая из повторяющихся блоков — нуклеотидов («букв» генетического кода). Химически возможно четыре различных нуклеотида (аденин, тимин, гуанин и цитозин), обозначающиеся соответственно буквами: A, T, G и C. Получение стандартного образца основано на последовательности ферментативных химических реакций, модифицирующих («вырезающих» необходимый фрагмент) известную последовательность ДНК плазмиды pUC18. Основными метрологическими характеристиками стандартного образца являются:-
- последовательность нуклеотидов (A, T, G и С)
Приложение к свидетельству № 2219 лист № 2 об утверждении типа стандартного образца всего листов 5 (обязательное)
- количество нуклеотидов (длина последовательности стандартного образца).
Последовательность ДНК состоит из двух комплементарных цепочек. Комплементарность -одно из основных свойств цепочек ДНК (последовательности «букв»). Оно проявляется в том, что к каждому нуклеотиду прямой последовательности (A, T, G или C) присоединяется комплементарный нуклеотид обратной последовательности по закону (AoT, GoC). Данная комплементарная последовательность образует вторую (обратную) цепочку. При этом комплементарная цепочка записывается с противоположного конца из-за химического строения молекулы ДНК (например, к цепочке AACTGT комплементарная будет записана в виде ACAGTT).
Стандартный образец представляет собой фрагмент плазмиды pUC18 (Yanisch-Perron, C., et al., Improved M13 phage cloning vectors and host strains: nucleotide sequences of the M13mp18 and pUC19 vectors, Gene, 33, 103-119, 1985.), длина которой составляет 2686 нуклеотидов (как в прямой так и в комплементарной цепочках). Нуклеотидная последовательность (прямая и комплементарная) плазмиды pUC18 имеет следующий вид (Последовательность стандартного образца выделена серым цветом):
1 CTATGCGGCA TCAGAGCAGA TTGTACTGAG AGTGCACCAT ATGCGGTGTG AAATACCGCA
GATACGCCGT AGTCTCGTCT AACATGACTC TCACGTGGTA TACGCCACAC TTTATGGCGT
61
121
181
241
CAGATGCGTA AGGAGAAAAT ACCGCATCAG GCGCCATTCG CCATTCAGGC TGCGCAACTG GTCTACGCAT TCCTCTTTTA TGGCGTAGTC CGCGGTAAGC GGTAAGTCCG ACGCGTTGAC
TTGGGAAGGG CGATCGGTGC GGGCCTCTTC GCTATTACGC CAGCTGGCGA AAGGGGGATG
AACCCTTCCC GCTAGCCACG CCCGGAGAAG CGATAATGCG GTCGACCGCT TTCCCCCTAC
TGCTGCAAGG CGATTAAGTT GGGTAACGCC AGGGTTTTCC CAGTCACGAC GTTGTAAAAC
ACGACGTTCC GCTAATTCAA CCCATTGCGG TCCCAAAAGG GTCAGTGCTG CAACATTTTG
GACGGCCAGT GCCAAGCTTG CATGCCTGCA GGTCGACTCT AGAGGATCCC CGGGTACCGA
CTGCCGGTCA CGGTTCGAAC GTACGGACGT CCAGCTGAGA TCTCCTAGGG GCCCATGGCT
301 |
GCTCGAATTC CGAGCTTAAG |
GTAATCATGG CATTAGTACC |
TCATAGCTGT AGTATCGACA |
TTCCTGTGTG AAGGACACAC |
AAATTGTTAT TTTAACAATA |
CCGCTCACAA GGCGAGTGTT |
361 |
TTCCACACAA AAGGTGTGTT |
CATACGAGCC GTATGCTCGG |
GGAAGCATAA CCTTCGTATT |
AGTGTAAAGC TCACATTTCG |
CTGGGGTGCC GACCCCACGG |
TAATGAGTGA ATTACTCACT |
421 |
GCTAACTCAC CGATTGAGTG |
ATTAATTGCG TAATTAACGC |
TTGCGCTCAC AACGCGAGTG |
TGCCCGCTTT ACGGGCGAAA |
CCAGTCGGGA GGTCAGCCCT |
AACCTGTCGT TTGGACAGCA |
481 |
GCCAGCTGCA CGGTCGACGT |
TTAATGAATC AATTACTTAG |
GGCCAACGCG CCGGTTGCGC |
CGGGGAGAGG GCCCCTCTCC |
CGGTTTGCGT GCCAAACGCA |
ATTGGGCGCT TAACCCGCGA |
541 |
CTTCCGCTTC GAAGGCGAAG |
CTCGCTCACT GAGCGAGTGA |
GACTCGCTGC CTGAGCGACG |
GCTCGGTCGT CGAGCCAGCA |
TCGGCTGCGG AGCCGACGCC |
CGAGCGGTAT GCTCGCCATA |
601 |
CAGCTCACTC GTCGAGTGAG |
AAAGGCGGTA TTTCCGCCAT |
ATACGGTTAT TATGCCAATA |
CCACAGAATC GGTGTCTTAG |
AGGGGATAAC TCCCCTATTG |
GCAGGAAAGA CGTCCTTTCT |
661 |
ACATGTGAGC TGTACACTCG |
AAAAGGCCAG TTTTCCGGTC |
CAAAAGGCCA GTTTTCCGGT |
GGAACCGTAA CCTTGGCATT |
AAAGGCCGCG TTTCCGGCGC |
TTGCTGGCGT AACGACCGCA |
721 |
TTTTCCATAG AAAAGGTATC |
GCTCCGCCCC CGAGGCGGGG |
CCTGACGAGC GGACTGCTCG |
ATCACAAAAA TAGTGTTTTT |
TCGACGCTCA AGCTGCGAGT |
AGTCAGAGGT TCAGTCTCCA |
781 |
GGCGAAACCC CCGCTTTGGG |
GACAGGACTA CTGTCCTGAT |
TAAAGATACC ATTTCTATGG |
AGGCGTTTCC TCCGCAAAGG |
CCCTGGAAGC GGGACCTTCG |
TCCCTCGTGC AGGGAGCACG |
841 |
GCTCTCCTGT CGAGAGGACA |
TCCGACCCTG AGGCTGGGAC |
CCGCTTACCG GGCGAATGGC |
GATACCTGTC CTATGGACAG |
CGCCTTTCTC GCGGAAAGAG |
CCTTCGGGAA GGAAGCCCTT |
901 |
GCGTGGCGCT CGCACCGCGA |
TTCTCATAGC AAGAGTATCG |
TCACGCTGTA AGTGCGACAT |
GGTATCTCAG CCATAGAGTC |
TTCGGTGTAG AAGCCACATC |
GTCGTTCGCT CAGCAAGCGA |
961 CCAAGCTGGG CTGTGTGCAC GAACCCCCCG TTCAGCCCGA CCGCTGCGCC TTATCCGGTA
Приложение к свидетельству № 2219 об утверждении типа стандартного образца (обязательное)
GGTTCGACCC |
GACACACGTG |
CTTGGGGGGC |
AAGTCGGGCT |
GGCGACGCGG |
AATAGGCCAT | |
1021 |
ACTATCGTCT TGATAGCAGA |
TGAGTCCAAC ACTCAGGTTG |
CCGGTAAGAC GGCCATTCTG |
ACGACTTATC TGCTGAATAG |
GCCACTGGCA CGGTGACCGT |
GCAGCCACTG CGTCGGTGAC |
1081 |
GTAACAGGAT CATTGTCCTA |
TAGCAGAGCG ATCGTCTCGC |
AGGTATGTAG TCCATACATC |
GCGGTGCTAC CGCCACGATG |
AGAGTTCTTG TCTCAAGAAC |
AAGTGGTGGC TTCACCACCG |
1141 |
CTAACTACGG GATTGATGCC |
CTACACTAGA GATGTGATCT |
AGGACAGTAT TCCTGTCATA |
TTGGTATCTG AACCATAGAC |
CGCTCTGCTG GCGAGACGAC |
AAGCCAGTTA TTCGGTCAAT |
1201 |
CCTTCGGAAA GGAAGCCTTT |
AAGAGTTGGT TTCTCAACCA |
AGCTCTTGAT TCGAGAACTA |
CCGGCAAACA GGCCGTTTGT |
AACCACCGCT TTGGTGGCGA |
GGTAGCGGTG CCATCGCCAC |
1261 |
GTTTTTTTGT CAAAAAAACA |
TTGCAAGCAG AACGTTCGTC |
CAGATTACGC GTCTAATGCG |
GCAGAAAAAA CGTCTTTTTT |
AGGATCTCAA TCCTAGAGTT |
GAAGATCCTT CTTCTAGGAA |
1321 |
TGATCTTTTC ACTAGAAAAG |
TACGGGGTCT ATGCCCCAGA |
GACGCTCAGT CTGCGAGTCA |
GGAACGAAAA CCTTGCTTTT |
CTCACGTTAA GAGTGCAATT |
GGGATTTTGG CCCTAAAACC |
1381 |
TCATGAGATT AGTACTCTAA |
ATCAAAAAGG TAGTTTTTCC |
ATCTTCACCT TAGAAGTGGA |
AGATCCTTTT TCTAGGAAAA |
AAATTAAAAA TTTAATTTTT |
TGAAGTTTTA ACTTCAAAAT |
1441 |
AATCAATCTA TTAGTTAGAT |
AAGTATATAT TTCATATATA |
GAGTAAACTT CTCATTTGAA |
GGTCTGACAG CCAGACTGTC |
TTACCAATGC AATGGTTACG |
TTAATCAGTG AATTAGTCAC |
1501 |
AGGCACCTAT TCCGTGGATA |
CTCAGCGATC GAGTCGCTAG |
TGTCTATTTC ACAGATAAAG |
GTTCATCCAT CAAGTAGGTA |
AGTTGCCTGA TCAACGGACT |
CTCCCCGTCG GAGGGGCAGC |
1561 |
TGTAGATAAC ACATCTATTG |
TACGATACGG ATGCTATGCC |
GAGGGCTTAC CTCCCGAATG |
CATCTGGCCC GTAGACCGGG |
CAGTGCTGCA GTCACGACGT |
ATGATACCGC TACTATGGCG |
1621 |
GAGACCCACG CTCTGGGTGC |
CTCACCGGCT GAGTGGCCGA |
CCAGATTTAT GGTCTAAATA |
CAGCAATAAA GTCGTTATTT |
CCAGCCAGCC GGTCGGTCGG |
GGAAGGGCCG CCTTCCCGGC |
1681 |
AGCGCAGAAG TCGCGTCTTC |
TGGTCCTGCA ACCAGGACGT |
ACTTTATCCG TGAAATAGGC |
CCTCCATCCA GGAGGTAGGT |
GTCTATTAAT CAGATAATTA |
TGTTGCCGGG ACAACGGCCC |
1741 |
AAGCTAGAGT TTCGATCTCA |
AAGTAGTTCG TTCATCAAGC |
CCAGTTAATA GGTCAATTAT |
GTTTGCGCAA CAAACGCGTT |
CGTTGTTGCC GCAACAACGG |
ATTGCTACAG TAACGATGTC |
1801 |
GCATCGTGGT CGTAGCACCA |
GTCACGCTCG CAGTGCGAGC |
TCGTTTGGTA AGCAAACCAT |
TGGCTTCATT ACCGAAGTAA |
CAGCTCCGGT GTCGAGGCCA |
TCCCAACGAT AGGGTTGCTA |
1861 |
CAAGGCGAGT GTTCCGCTCA |
TACATGATCC ATGTACTAGG |
CCCATGTTGT GGGTACAACA |
GCAAAAAAGC CGTTTTTTCG |
GGTTAGCTCC CCAATCGAGG |
TTCGGTCCTC AAGCCAGGAG |
1921 |
CGATCGTTGT GCTAGCAACA |
CAGAAGTAAG GTCTTCATTC |
TTGGCCGCAG AACCGGCGTC |
TGTTATCACT ACAATAGTGA |
CATGGTTATG GTACCAATAC |
GCAGCACTGC CGTCGTGACG |
1981 |
ATAATTCTCT TATTAAGAGA |
TACTGTCATG ATGACAGTAC |
CCATCCGTAA GGTAGGCATT |
GATGCTTTTC CTACGAAAAG |
TGTGACTGGT ACACTGACCA |
GAGTACTCAA CTCATGAGTT |
2041 |
CCAAGTCATT GGTTCAGTAA |
CTGAGAATAG GACTCTTATC |
TGTATGCGGC ACATACGCCG |
GACCGAGTTG CTGGCTCAAC |
CTCTTGCCCG GAGAACGGGC |
GCGTCAATAC CGCAGTTATG |
2101 |
GGGATAATAC CCCTATTATG |
CGCGCCACAT GCGCGGTGTA |
AGCAGAACTT TCGTCTTGAA |
TAAAAGTGCT ATTTTCACGA |
CATCATTGGA GTAGTAACCT |
AAACGTTCTT TTTGCAAGAA |
2161 |
CGGGGCGAAA GCCCCGCTTT |
ACTCTCAAGG TGAGAGTTCC |
ATCTTACCGC TAGAATGGCG |
TGTTGAGATC ACAACTCTAG |
CAGTTCGATG GTCAAGCTAC |
TAACCCACTC ATTGGGTGAG |
2221 |
GTGCACCCAA CACGTGGGTT |
CTGATCTTCA GACTAGAAGT |
GCATCTTTTA CGTAGAAAAT |
CTTTCACCAG GAAAGTGGTC |
CGTTTCTGGG GCAAAGACCC |
TGAGCAAAAA ACTCGTTTTT |
2281 |
CAGGAAGGCA GTCCTTCCGT |
AAATGCCGCA TTTACGGCGT |
AAAAAGGGAA TTTTTCCCTT |
TAAGGGCGAC ATTCCCGCTG |
ACGGAAATGT TGCCTTTACA |
TGAATACTCA ACTTATGAGT |
Приложение к свидетельству № 2219 лист № 4
об утверждении типа стандартного образца всего листов 5
2341 |
(обязательное) | |||||
TACTCTTCCT ATGAGAAGGA |
TTTTCAATAT AAAAGTTATA |
TATTGAAGCA ATAACTTCGT |
TTTATCAGGG AAATAGTCCC |
TTATTGTCTC AATAACAGAG |
ATGAGCGGAT TACTCGCCTA | |
2401 |
ACATATTTGA |
ATGTATTTAG |
AAAAATAAAC |
AAATAGGGGT |
TCCGCGCACA |
TTTCCCCGAA |
TGTATAAACT |
TACATAAATC |
TTTTTATTTG |
TTTATCCCCA |
AGGCGCGTGT |
AAAGGGGCTT | |
2461 |
AAGTGCCACC |
TGACGTCTAA |
GAAACCATTA |
TTATCATGAC |
ATTAACCTAT |
AAAAATAGGC |
TTCACGGTGG |
ACTGCAGATT |
CTTTGGTAAT |
AATAGTACTG |
TAATTGGATA |
TTTTTATCCG | |
2521 |
GTATCACGAG |
GCCCTTTCGT |
CTCGCGCGTT |
TCGGTGATGA |
CGGTGAAAAC |
CTCTGACACA |
CATAGTGCTC |
CGGGAAAGCA |
GAGCGCGCAA |
AGCCACTACT |
GCCACTTTTG |
GAGACTGTGT | |
2581 |
TGCAGCTCCC |
GGAGACGGTC |
ACAGCTTGTC |
TGTAAGCGGA |
TGCCGGGAGC |
AGACAAGCCC |
ACGTCGAGGG |
CCTCTGCCAG |
TGTCGAACAG |
ACATTCGCCT |
ACGGCCCTCG |
TCTGTTCGGG | |
2641 |
GTCAGGGCGC CAGTCCCGCG |
GTCAGCGGGT CAGTCGCCCA |
GTTGGCGGGT CAACCGCCCA |
GTCGGGGCTG CAGCCCCGAC |
GCTTAA CGAATT |
В качестве стандартного образца используется фрагмент длиной 271 нуклеотид, полученный в результате обработки плазмиды pUC18 ферментом рестрикции RsaI. Рестриктаза - бактериальный фермент, распознающий специфическую последовательность в двухцепочечной ДНК длиной 4 - 6 нуклеотидов и расщепляющий непрерывную двухцепочечную ДНК именно в этом участке. Карта, показывающая, где кольцевая цепочка ДНК расщепляется ферментом Rsa I, представлена на рис. 1. Стандартный образец представляет собой фрагмент, отмеченный на рис. 1 сплошным синим цветом. Его длина составляет 271 нуклеотид в каждой из двух комплементарных цепочек. Объем водного раствора стандартного образца составляет 200 мкл.
Рисунок 1. Рестрикционная карта фермента RsaI плазмиды pUC18.
Комплектность стандартного образца
Документы, устанавливающие требования к стандартному образцу
Метрологические характеристики
Аттестуемые характеристики:
-
1. Концентрация ДНК в водном растворе
-
2. Последовательность нуклеотидов стандартного образца (прямая и комплементарная);
-
3. Количество нуклеотидов в последовательности стандартного образца
Приложение к свидетельству № 2219 об утверждении типа стандартного образца (обязательное)
Нормированные метрологические характеристики:
-
1. Концентрация ДНК в водном растворе (Таблица 1)
Т а б л и ц а 1 - Нормированные метрологические характеристики
Индекс СО |
Наименование аттестуемой характеристики |
Аттестованное значение, нг/мкл |
Границы относительной погрешности при Р=0,95, %* |
Концентрация ДНК в водном растворе |
49,1 |
10,7 |
-
2. Последовательность нуклеотидов стандартного образца (прямая последовательность выделена серым цветом, обратная последовательность - без выделений):
1 ACTGAGAGTG CACCATATGC GGTGTGAAAT ACCGCACAGA TGCGTAAGGA GAAAATACCG
TGACTCTCAC GTGGTATACG CCACACTTTA TGGCGTGTCT ACGCATTCCT CTTTTATGGC
61 CATCAGGCGC CATTCGCCAT TCAGGCTGCG CAACTGTTGG GAAGGGCGAT CGGTGCGGGC
GTAGTCCGCG GTAAGCGGTA AGTCCGACGC GTTGACAACC CTTCCCGCTA GCCACGCCCG
121 CTCTTCGCTA TTACGCCAGC TGGCGAAAGG GGGATGTGCT GCAAGGCGAT TAAGTTGGGT
GAGAAGCGAT AATGCGGTCG ACCGCTTTCC CCCTACACGA CGTTCCGCTA ATTCAACCCA
181 AACGCCAGGG TTTTCCCAGT CACGACGTTG TAAAACGACG GCCAGTGCCA AGCTTGCATG
TTGCGGTCCC AAAAGGGTCA GTGCTGCAAC ATTTTGCTGC CGGTCACGGT TCGAACGTAC 241 CCTGCAGGTC GACTCTAGAG GATCCCCGGG T
GGACGTCCAG CTGAGATCTC CTAGGGGCCC A
-
3. Последовательность пар нуклеотидов стандартного образца включает 271 единицу.
СРОК ГОДНОСТИ ЭКЗЕМПЛЯРА: 5 лет при -20°С
Место и способ нанесения знака утверждения типа на сопроводительные документы стандартного образца: печатным способом в правом верхнем углу первого листа паспорта и этикетки.
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ СВЕДЕНИЯ:РАЗРАБОТЧИК: - Учреждение Российской академии наук Центр «Биоинженерия» РАН 117312 Россия, Москва, пр-т 60-летия Октября д.7, корп.1.
ИЗГОТОВИТЕЛЬ: - Учреждение Российской академии наук Центр «Биоинженерия» РАН 117312 Россия, Москва, пр-т 60-летия Октября д.7, корп.1.
Заместитель Руководителя Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии
Е.Р.Петросян
подпись расшифровка подписи
М.п. «___» _______________2011 г.
Статистика
Кол-во поверок - 153
Кол-во поверок (подведы РСТ) - 67
Кол-во поверок (неподведы РСТ) - 86
Кол-во поверок (гос. организации) - 147
Кол-во поверок (чвстники) - 6
Кол-во владельцев - 12
Все стандартные образцы Учреждение РАН Центр "Биоинженерия" РАН
Номер в реестре | Наименование СО | Статус |
---|---|---|
ГСО 9931-2011 | СО ФРАГМЕНТА ПЛАЗМИДЫ рUC18 ДЛИНОЙ 271 НУКЛЕОТИД | Срок действия истек |
Владельцы ГСО 9931-2011 СО ФРАГМЕНТА ПЛАЗМИДЫ рUC18 ДЛИНОЙ 271 НУКЛЕОТИД
Организация | Кол-во поверок |
---|---|
ФБУ "БЕЛГОРОДСКИЙ ЦСМ" | 1 шт. |
ФБУ "ТЕСТ-С.-ПЕТЕРБУРГ" | 32 шт. |
ГАУ "ГОРМЕДТЕХНИКА" | 24 шт. |
ФГУП "ВНИИМ ИМ. Д.И.МЕНДЕЛЕЕВА" | 1 шт. |
ООО «МетрЛифтСервис» | 2 шт. |
ГАУ "ГОРМЕДТЕХНИКА" | 23 шт. |
ФБУ "ИРКУТСКИЙ ЦСМ" | 1 шт. |
ФБУ "САРАТОВСКИЙ ЦСМ ИМ. Б.А. ДУБОВИКОВА" | 3 шт. |
ООО "ИНЭКС СЕРТ" | 4 шт. |
ФБУ "СТАВРОПОЛЬСКИЙ ЦСМ" | 3 шт. |
ФБУ "ТЕСТ-С.-ПЕТЕРБУРГ" | 55 шт. |
ФБУ "ПЕРМСКИЙ ЦСМ" | 4 шт. |
лист № 1
всего листов 5
Приложение к свидетельству № 2219 об утверждении типа стандартного образца
(обязательное)
ДОКУМЕНТЫ, устанавливающие требования к метрологическим и техническим характеристикам и выпуску из производства: техническое задание на разработку стандартного образца фрагмента плазмиды pUC18 длиной 271 нуклеотид; программа испытаний стандартного образца фрагмента плазмиды pUC18 длиной 271 нуклеотид в целях утверждения типа.
Периодичность актуализации технической документации на тип стандартного образца - один раз в пять лет.
ФОРМА ВЫПУСКА: единичное производство.
НОМЕР ЭКЗЕМПЛЯРА (ПАРТИИ), ДАТА ВЫПУСКА: №001, дата выпуска 30 июня 2011 г.
НАЗНАЧЕНИЕ: поверка и калибровка автоматических секвенаторов, а также контроль метрологических характеристик при проведении их испытаний, в том числе с целью утверждения типа.
СФЕРА ПРИМЕНЕНИЯ:-
- сфера государственного регулирования: осуществление деятельности в области здравоохранения, осуществление ветеринарной деятельности, осуществление деятельности в области охраны окружающей среды, выполнение работ по оценке соответствия промышленной продукции и продукции других видов, а также иных объектов установленным законодательством Российской Федерации обязательным требованиям, осуществлении мероприятий государственного контроля (надзора);
-
- область применения: здравоохранение, ветеринария, охрана окружающей среды, сельскохозяйственная и промышленная биотехнология, научно-исследовательская деятельность.
ДОКУМЕНТЫ, определяющие применение:
ОПИСАНИЕ: Стандартный образец представляет собой известную четко определенную последовательность ДНК. С химической точки зрения ДНК — это длинная полимерная молекула, состоящая из повторяющихся блоков — нуклеотидов («букв» генетического кода). Химически возможно четыре различных нуклеотида (аденин, тимин, гуанин и цитозин), обозначающиеся соответственно буквами: A, T, G и C. Получение стандартного образца основано на последовательности ферментативных химических реакций, модифицирующих («вырезающих» необходимый фрагмент) известную последовательность ДНК плазмиды pUC18. Основными метрологическими характеристиками стандартного образца являются:
-
- последовательность нуклеотидов (A, T, G и С)
Приложение к свидетельству № 2219 лист № 2 об утверждении типа стандартного образца всего листов 5 (обязательное)
- количество нуклеотидов (длина последовательности стандартного образца).
Последовательность ДНК состоит из двух комплементарных цепочек. Комплементарность -одно из основных свойств цепочек ДНК (последовательности «букв»). Оно проявляется в том, что к каждому нуклеотиду прямой последовательности (A, T, G или C) присоединяется комплементарный нуклеотид обратной последовательности по закону (AoT, GoC). Данная комплементарная последовательность образует вторую (обратную) цепочку. При этом комплементарная цепочка записывается с противоположного конца из-за химического строения молекулы ДНК (например, к цепочке AACTGT комплементарная будет записана в виде ACAGTT).
Стандартный образец представляет собой фрагмент плазмиды pUC18 (Yanisch-Perron, C., et al., Improved M13 phage cloning vectors and host strains: nucleotide sequences of the M13mp18 and pUC19 vectors, Gene, 33, 103-119, 1985.), длина которой составляет 2686 нуклеотидов (как в прямой так и в комплементарной цепочках). Нуклеотидная последовательность (прямая и комплементарная) плазмиды pUC18 имеет следующий вид (Последовательность стандартного образца выделена серым цветом):
1 CTATGCGGCA TCAGAGCAGA TTGTACTGAG AGTGCACCAT ATGCGGTGTG AAATACCGCA
GATACGCCGT AGTCTCGTCT AACATGACTC TCACGTGGTA TACGCCACAC TTTATGGCGT
61
121
181
241
CAGATGCGTA AGGAGAAAAT ACCGCATCAG GCGCCATTCG CCATTCAGGC TGCGCAACTG GTCTACGCAT TCCTCTTTTA TGGCGTAGTC CGCGGTAAGC GGTAAGTCCG ACGCGTTGAC
TTGGGAAGGG CGATCGGTGC GGGCCTCTTC GCTATTACGC CAGCTGGCGA AAGGGGGATG
AACCCTTCCC GCTAGCCACG CCCGGAGAAG CGATAATGCG GTCGACCGCT TTCCCCCTAC
TGCTGCAAGG CGATTAAGTT GGGTAACGCC AGGGTTTTCC CAGTCACGAC GTTGTAAAAC
ACGACGTTCC GCTAATTCAA CCCATTGCGG TCCCAAAAGG GTCAGTGCTG CAACATTTTG
GACGGCCAGT GCCAAGCTTG CATGCCTGCA GGTCGACTCT AGAGGATCCC CGGGTACCGA
CTGCCGGTCA CGGTTCGAAC GTACGGACGT CCAGCTGAGA TCTCCTAGGG GCCCATGGCT
301 |
GCTCGAATTC CGAGCTTAAG |
GTAATCATGG CATTAGTACC |
TCATAGCTGT AGTATCGACA |
TTCCTGTGTG AAGGACACAC |
AAATTGTTAT TTTAACAATA |
CCGCTCACAA GGCGAGTGTT |
361 |
TTCCACACAA AAGGTGTGTT |
CATACGAGCC GTATGCTCGG |
GGAAGCATAA CCTTCGTATT |
AGTGTAAAGC TCACATTTCG |
CTGGGGTGCC GACCCCACGG |
TAATGAGTGA ATTACTCACT |
421 |
GCTAACTCAC CGATTGAGTG |
ATTAATTGCG TAATTAACGC |
TTGCGCTCAC AACGCGAGTG |
TGCCCGCTTT ACGGGCGAAA |
CCAGTCGGGA GGTCAGCCCT |
AACCTGTCGT TTGGACAGCA |
481 |
GCCAGCTGCA CGGTCGACGT |
TTAATGAATC AATTACTTAG |
GGCCAACGCG CCGGTTGCGC |
CGGGGAGAGG GCCCCTCTCC |
CGGTTTGCGT GCCAAACGCA |
ATTGGGCGCT TAACCCGCGA |
541 |
CTTCCGCTTC GAAGGCGAAG |
CTCGCTCACT GAGCGAGTGA |
GACTCGCTGC CTGAGCGACG |
GCTCGGTCGT CGAGCCAGCA |
TCGGCTGCGG AGCCGACGCC |
CGAGCGGTAT GCTCGCCATA |
601 |
CAGCTCACTC GTCGAGTGAG |
AAAGGCGGTA TTTCCGCCAT |
ATACGGTTAT TATGCCAATA |
CCACAGAATC GGTGTCTTAG |
AGGGGATAAC TCCCCTATTG |
GCAGGAAAGA CGTCCTTTCT |
661 |
ACATGTGAGC TGTACACTCG |
AAAAGGCCAG TTTTCCGGTC |
CAAAAGGCCA GTTTTCCGGT |
GGAACCGTAA CCTTGGCATT |
AAAGGCCGCG TTTCCGGCGC |
TTGCTGGCGT AACGACCGCA |
721 |
TTTTCCATAG AAAAGGTATC |
GCTCCGCCCC CGAGGCGGGG |
CCTGACGAGC GGACTGCTCG |
ATCACAAAAA TAGTGTTTTT |
TCGACGCTCA AGCTGCGAGT |
AGTCAGAGGT TCAGTCTCCA |
781 |
GGCGAAACCC CCGCTTTGGG |
GACAGGACTA CTGTCCTGAT |
TAAAGATACC ATTTCTATGG |
AGGCGTTTCC TCCGCAAAGG |
CCCTGGAAGC GGGACCTTCG |
TCCCTCGTGC AGGGAGCACG |
841 |
GCTCTCCTGT CGAGAGGACA |
TCCGACCCTG AGGCTGGGAC |
CCGCTTACCG GGCGAATGGC |
GATACCTGTC CTATGGACAG |
CGCCTTTCTC GCGGAAAGAG |
CCTTCGGGAA GGAAGCCCTT |
901 |
GCGTGGCGCT CGCACCGCGA |
TTCTCATAGC AAGAGTATCG |
TCACGCTGTA AGTGCGACAT |
GGTATCTCAG CCATAGAGTC |
TTCGGTGTAG AAGCCACATC |
GTCGTTCGCT CAGCAAGCGA |
961 CCAAGCTGGG CTGTGTGCAC GAACCCCCCG TTCAGCCCGA CCGCTGCGCC TTATCCGGTA
Приложение к свидетельству № 2219 об утверждении типа стандартного образца (обязательное)
GGTTCGACCC |
GACACACGTG |
CTTGGGGGGC |
AAGTCGGGCT |
GGCGACGCGG |
AATAGGCCAT | |
1021 |
ACTATCGTCT TGATAGCAGA |
TGAGTCCAAC ACTCAGGTTG |
CCGGTAAGAC GGCCATTCTG |
ACGACTTATC TGCTGAATAG |
GCCACTGGCA CGGTGACCGT |
GCAGCCACTG CGTCGGTGAC |
1081 |
GTAACAGGAT CATTGTCCTA |
TAGCAGAGCG ATCGTCTCGC |
AGGTATGTAG TCCATACATC |
GCGGTGCTAC CGCCACGATG |
AGAGTTCTTG TCTCAAGAAC |
AAGTGGTGGC TTCACCACCG |
1141 |
CTAACTACGG GATTGATGCC |
CTACACTAGA GATGTGATCT |
AGGACAGTAT TCCTGTCATA |
TTGGTATCTG AACCATAGAC |
CGCTCTGCTG GCGAGACGAC |
AAGCCAGTTA TTCGGTCAAT |
1201 |
CCTTCGGAAA GGAAGCCTTT |
AAGAGTTGGT TTCTCAACCA |
AGCTCTTGAT TCGAGAACTA |
CCGGCAAACA GGCCGTTTGT |
AACCACCGCT TTGGTGGCGA |
GGTAGCGGTG CCATCGCCAC |
1261 |
GTTTTTTTGT CAAAAAAACA |
TTGCAAGCAG AACGTTCGTC |
CAGATTACGC GTCTAATGCG |
GCAGAAAAAA CGTCTTTTTT |
AGGATCTCAA TCCTAGAGTT |
GAAGATCCTT CTTCTAGGAA |
1321 |
TGATCTTTTC ACTAGAAAAG |
TACGGGGTCT ATGCCCCAGA |
GACGCTCAGT CTGCGAGTCA |
GGAACGAAAA CCTTGCTTTT |
CTCACGTTAA GAGTGCAATT |
GGGATTTTGG CCCTAAAACC |
1381 |
TCATGAGATT AGTACTCTAA |
ATCAAAAAGG TAGTTTTTCC |
ATCTTCACCT TAGAAGTGGA |
AGATCCTTTT TCTAGGAAAA |
AAATTAAAAA TTTAATTTTT |
TGAAGTTTTA ACTTCAAAAT |
1441 |
AATCAATCTA TTAGTTAGAT |
AAGTATATAT TTCATATATA |
GAGTAAACTT CTCATTTGAA |
GGTCTGACAG CCAGACTGTC |
TTACCAATGC AATGGTTACG |
TTAATCAGTG AATTAGTCAC |
1501 |
AGGCACCTAT TCCGTGGATA |
CTCAGCGATC GAGTCGCTAG |
TGTCTATTTC ACAGATAAAG |
GTTCATCCAT CAAGTAGGTA |
AGTTGCCTGA TCAACGGACT |
CTCCCCGTCG GAGGGGCAGC |
1561 |
TGTAGATAAC ACATCTATTG |
TACGATACGG ATGCTATGCC |
GAGGGCTTAC CTCCCGAATG |
CATCTGGCCC GTAGACCGGG |
CAGTGCTGCA GTCACGACGT |
ATGATACCGC TACTATGGCG |
1621 |
GAGACCCACG CTCTGGGTGC |
CTCACCGGCT GAGTGGCCGA |
CCAGATTTAT GGTCTAAATA |
CAGCAATAAA GTCGTTATTT |
CCAGCCAGCC GGTCGGTCGG |
GGAAGGGCCG CCTTCCCGGC |
1681 |
AGCGCAGAAG TCGCGTCTTC |
TGGTCCTGCA ACCAGGACGT |
ACTTTATCCG TGAAATAGGC |
CCTCCATCCA GGAGGTAGGT |
GTCTATTAAT CAGATAATTA |
TGTTGCCGGG ACAACGGCCC |
1741 |
AAGCTAGAGT TTCGATCTCA |
AAGTAGTTCG TTCATCAAGC |
CCAGTTAATA GGTCAATTAT |
GTTTGCGCAA CAAACGCGTT |
CGTTGTTGCC GCAACAACGG |
ATTGCTACAG TAACGATGTC |
1801 |
GCATCGTGGT CGTAGCACCA |
GTCACGCTCG CAGTGCGAGC |
TCGTTTGGTA AGCAAACCAT |
TGGCTTCATT ACCGAAGTAA |
CAGCTCCGGT GTCGAGGCCA |
TCCCAACGAT AGGGTTGCTA |
1861 |
CAAGGCGAGT GTTCCGCTCA |
TACATGATCC ATGTACTAGG |
CCCATGTTGT GGGTACAACA |
GCAAAAAAGC CGTTTTTTCG |
GGTTAGCTCC CCAATCGAGG |
TTCGGTCCTC AAGCCAGGAG |
1921 |
CGATCGTTGT GCTAGCAACA |
CAGAAGTAAG GTCTTCATTC |
TTGGCCGCAG AACCGGCGTC |
TGTTATCACT ACAATAGTGA |
CATGGTTATG GTACCAATAC |
GCAGCACTGC CGTCGTGACG |
1981 |
ATAATTCTCT TATTAAGAGA |
TACTGTCATG ATGACAGTAC |
CCATCCGTAA GGTAGGCATT |
GATGCTTTTC CTACGAAAAG |
TGTGACTGGT ACACTGACCA |
GAGTACTCAA CTCATGAGTT |
2041 |
CCAAGTCATT GGTTCAGTAA |
CTGAGAATAG GACTCTTATC |
TGTATGCGGC ACATACGCCG |
GACCGAGTTG CTGGCTCAAC |
CTCTTGCCCG GAGAACGGGC |
GCGTCAATAC CGCAGTTATG |
2101 |
GGGATAATAC CCCTATTATG |
CGCGCCACAT GCGCGGTGTA |
AGCAGAACTT TCGTCTTGAA |
TAAAAGTGCT ATTTTCACGA |
CATCATTGGA GTAGTAACCT |
AAACGTTCTT TTTGCAAGAA |
2161 |
CGGGGCGAAA GCCCCGCTTT |
ACTCTCAAGG TGAGAGTTCC |
ATCTTACCGC TAGAATGGCG |
TGTTGAGATC ACAACTCTAG |
CAGTTCGATG GTCAAGCTAC |
TAACCCACTC ATTGGGTGAG |
2221 |
GTGCACCCAA CACGTGGGTT |
CTGATCTTCA GACTAGAAGT |
GCATCTTTTA CGTAGAAAAT |
CTTTCACCAG GAAAGTGGTC |
CGTTTCTGGG GCAAAGACCC |
TGAGCAAAAA ACTCGTTTTT |
2281 |
CAGGAAGGCA GTCCTTCCGT |
AAATGCCGCA TTTACGGCGT |
AAAAAGGGAA TTTTTCCCTT |
TAAGGGCGAC ATTCCCGCTG |
ACGGAAATGT TGCCTTTACA |
TGAATACTCA ACTTATGAGT |
Приложение к свидетельству № 2219 лист № 4
об утверждении типа стандартного образца всего листов 5
2341 |
(обязательное) | |||||
TACTCTTCCT ATGAGAAGGA |
TTTTCAATAT AAAAGTTATA |
TATTGAAGCA ATAACTTCGT |
TTTATCAGGG AAATAGTCCC |
TTATTGTCTC AATAACAGAG |
ATGAGCGGAT TACTCGCCTA | |
2401 |
ACATATTTGA |
ATGTATTTAG |
AAAAATAAAC |
AAATAGGGGT |
TCCGCGCACA |
TTTCCCCGAA |
TGTATAAACT |
TACATAAATC |
TTTTTATTTG |
TTTATCCCCA |
AGGCGCGTGT |
AAAGGGGCTT | |
2461 |
AAGTGCCACC |
TGACGTCTAA |
GAAACCATTA |
TTATCATGAC |
ATTAACCTAT |
AAAAATAGGC |
TTCACGGTGG |
ACTGCAGATT |
CTTTGGTAAT |
AATAGTACTG |
TAATTGGATA |
TTTTTATCCG | |
2521 |
GTATCACGAG |
GCCCTTTCGT |
CTCGCGCGTT |
TCGGTGATGA |
CGGTGAAAAC |
CTCTGACACA |
CATAGTGCTC |
CGGGAAAGCA |
GAGCGCGCAA |
AGCCACTACT |
GCCACTTTTG |
GAGACTGTGT | |
2581 |
TGCAGCTCCC |
GGAGACGGTC |
ACAGCTTGTC |
TGTAAGCGGA |
TGCCGGGAGC |
AGACAAGCCC |
ACGTCGAGGG |
CCTCTGCCAG |
TGTCGAACAG |
ACATTCGCCT |
ACGGCCCTCG |
TCTGTTCGGG | |
2641 |
GTCAGGGCGC CAGTCCCGCG |
GTCAGCGGGT CAGTCGCCCA |
GTTGGCGGGT CAACCGCCCA |
GTCGGGGCTG CAGCCCCGAC |
GCTTAA CGAATT |
В качестве стандартного образца используется фрагмент длиной 271 нуклеотид, полученный в результате обработки плазмиды pUC18 ферментом рестрикции RsaI. Рестриктаза - бактериальный фермент, распознающий специфическую последовательность в двухцепочечной ДНК длиной 4 - 6 нуклеотидов и расщепляющий непрерывную двухцепочечную ДНК именно в этом участке. Карта, показывающая, где кольцевая цепочка ДНК расщепляется ферментом Rsa I, представлена на рис. 1. Стандартный образец представляет собой фрагмент, отмеченный на рис. 1 сплошным синим цветом. Его длина составляет 271 нуклеотид в каждой из двух комплементарных цепочек. Объем водного раствора стандартного образца составляет 200 мкл.
Рисунок 1. Рестрикционная карта фермента RsaI плазмиды pUC18.
НОРМИРОВАННЫЕ МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ:Аттестуемые характеристики:
-
1. Концентрация ДНК в водном растворе
-
2. Последовательность нуклеотидов стандартного образца (прямая и комплементарная);
-
3. Количество нуклеотидов в последовательности стандартного образца
Приложение к свидетельству № 2219 об утверждении типа стандартного образца (обязательное)
Нормированные метрологические характеристики:
-
1. Концентрация ДНК в водном растворе (Таблица 1)
Т а б л и ц а 1 - Нормированные метрологические характеристики
Индекс СО |
Наименование аттестуемой характеристики |
Аттестованное значение, нг/мкл |
Границы относительной погрешности при Р=0,95, %* |
Концентрация ДНК в водном растворе |
49,1 |
10,7 |
-
2. Последовательность нуклеотидов стандартного образца (прямая последовательность выделена серым цветом, обратная последовательность - без выделений):
1 ACTGAGAGTG CACCATATGC GGTGTGAAAT ACCGCACAGA TGCGTAAGGA GAAAATACCG
TGACTCTCAC GTGGTATACG CCACACTTTA TGGCGTGTCT ACGCATTCCT CTTTTATGGC
61 CATCAGGCGC CATTCGCCAT TCAGGCTGCG CAACTGTTGG GAAGGGCGAT CGGTGCGGGC
GTAGTCCGCG GTAAGCGGTA AGTCCGACGC GTTGACAACC CTTCCCGCTA GCCACGCCCG
121 CTCTTCGCTA TTACGCCAGC TGGCGAAAGG GGGATGTGCT GCAAGGCGAT TAAGTTGGGT
GAGAAGCGAT AATGCGGTCG ACCGCTTTCC CCCTACACGA CGTTCCGCTA ATTCAACCCA
181 AACGCCAGGG TTTTCCCAGT CACGACGTTG TAAAACGACG GCCAGTGCCA AGCTTGCATG
TTGCGGTCCC AAAAGGGTCA GTGCTGCAAC ATTTTGCTGC CGGTCACGGT TCGAACGTAC 241 CCTGCAGGTC GACTCTAGAG GATCCCCGGG T
GGACGTCCAG CTGAGATCTC CTAGGGGCCC A
-
3. Последовательность пар нуклеотидов стандартного образца включает 271 единицу.
СРОК ГОДНОСТИ ЭКЗЕМПЛЯРА: 5 лет при -20°С
Место и способ нанесения знака утверждения типа на сопроводительные документы стандартного образца: печатным способом в правом верхнем углу первого листа паспорта и этикетки.
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ СВЕДЕНИЯ:РАЗРАБОТЧИК: - Учреждение Российской академии наук Центр «Биоинженерия» РАН 117312 Россия, Москва, пр-т 60-летия Октября д.7, корп.1.
ИЗГОТОВИТЕЛЬ: - Учреждение Российской академии наук Центр «Биоинженерия» РАН 117312 Россия, Москва, пр-т 60-летия Октября д.7, корп.1.
Заместитель Руководителя Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии
Е.Р.Петросян
подпись расшифровка подписи
М.п. «___» _______________2011 г.