Методика поверки «ГСИ. Флуориметр Кристалл-БИО» (МП 069.Д4-18)

Заместитель директора ио инновациям ФГУП «ВНИИОФИ»

И.С. Филимонов «05 » октября 2018 г.

Государственная система обеспечения единства намерений

Главный метролог

ФГУП «ВНИИОФИ»

____ С.Н. Негода «05» октября 2018 г.

Москва 2018 г.

Настоящая методика поверки распространяется на Флуориметр Кристалл-БИО (далее - флуориметр), предназначенный для измерений относительных единиц флуоресценции и анализа флуоресцентного сигнала жидкой пробы, содержащей флуорофоры, в том числе, на основе полупроводниковых квантовых точек (КТ), и устанавливает порядок, методы и средства проведения первичной и периодической поверок.

Интервал между поверками 1 год.

2.1 При проведении первичной и периодической поверок должны быть выполнены операции, указанные в таблице 1.

Таблица 1 - Операции проведения поверки

2.2 При получении отрицательных результатов при проведении хотя бы одной операции поверка прекращается.

• 2.3 Поверкусредствсизмеренийосуществляют аккредитованныевустщювленном порядке в области обеспечения единства измерений юридические лица и индивидтееьные предприниматели.

• 3.1 При пруведениипернииной и чной одической чибкойкевижнвIOлжстpимeнeры

средства, указанные в таблице 2. Таблица 2 - Средства поверки

3.2 Средства поверки, указанные втаблице 2, должны быть поверены и аттестованы в усоевовлдввом порядке. Допускедося оекжд примдвдвид других средств, вд привдыдввых в таблице 2. но обеспечивающих определение (контроле) метрологических характеристик поверяемого флуориметра с требуемой точностью.

К проведению поверки допускают лиц, изучивших настоящую методику поверки и руководство по эксплуатации флуориметра, имеющих квалификационную группу не ниже III в соответствии с правилами по охране труда при эксплуатации электроустановок, указанных в приложении к приказу Министерства труда и социальной защиты РФ от 24.07.13 № 328Н и прошедшие полный инструктаж по технике Пезопасности, прошедших обучение на право проведения поверки по требуемому виду измерений.

• 5.1 Флуориметр должен устанавливаться в закрытых взрыво- и пожаробезопасных лабораторных помещениях, оборудованных вытяжной вентиляцией. При проведении поверки следует соблюдать требования, установленные ГОСТ Р 12.1.031-2010, ГОСТ 12.1.040-83. Оборудование, применяемое при поверке, должно соответствовать требованиям ГОСТ 12.2.003-91. Воздух рабочей зоны должен соответствовать ГОСТ 12.1.005-88 при температуре помещения, соответствующей условиям испытаний для легких физических работ.

• 5.2 Система электрического питания приборов должна быть защищена от колебаний и пиков сетевого напряжения, искровые генераторы не должны устанавливаться вблизи приборов.

• 5.3 При выполнении поверки должны соблюдаться требования, указанные в «Правилах техники безопасности при эксплуатации электроустановок потребителей», утвержденных Госэнергонадзором, а также требования руководства по эксплуатации флуориметра.

• 5.4 Помещение, в котором проводится поверка, должно соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83.

• 5.5 При использовании легковоспламеняющихся и токсичных растворителей для профподготовки необходимо обеспечить эффективную вентиляцию лабораторного помещения; иначе существует возможность отравления персонала и воспламенения испарений.

  6 Условия поверки

  6.1 При проведении поверки следует соблюдать следующие условия:

температура окружающей среды, °С.................................... от +18 до +28

относительная влажность воздуха, %, не более........... 80

атмосферное давление, мПа.................................... от 94 до 106.

• 6.2 Б помещении, где проводится поверка, должны отсутствовать факторы появления пыли, интенсивных воздушных потоков, вибрации и паров, вызывающих коррозию.

• 6.3 Флуориметр не должен подвергаться прямому воздействию солнечных лучей.

• 6.4  Флуориметр должен быть установлен на ровную горизонтальную поверхность.

• 7.1 В соответствии с приложением Б подготовить растворы № 1, 2, 3 на основе разбавления чистого флуоресцеина натрия, указанного в таблице 2.

• 7.2 Присоединить стандартный кабель электропитания к флуориметру и подключите его к сети электропитания.

• 7.3  Подключить флуориметр к персональному компьютеру (далее - ПК) с помощью Ethemet-кабеля. Установить на ПК программное обеспечение (далее - ПО), для этого необходимо скопировать содержимое флеш-накопителя, входящего в комплект поставки на ПК и вывести ярлык пускового файла на рабочий стол.

• 7.4  Включить флуориметр, используя выключатель на его задней панели. По завершении предварительных настроек на передней панели загорится зелёная лампочка

  (см. рисунок 1).

  Выдвижной столик флуориметра

  

  96- луночный планшет

  Лампочка включени

  Рисунок 1 - Общий вид флуориметра

• 7.5 Активироватьприложенре «жюминесЛентньш ектнер» и нажать ннопту «Подключение» в интерфейсе программы (см. Рисунок 2).

  

Когда подключение к флуориметру будет завершено, справа от вышеуказанной кнопки указание «Отключено», выполненное чёрными буквами, изменится на указание «Подключено», выполненное зелёными буквами.

• 8 Провенениеповерои

• 8.1.1 Внешним осмотром флуориметра должно быть установлено:

• - наличие маркировки, подтверждающей тип и заводской номер флуориметра;

• -  соответствие комплектности флуориметра требованиям нормативнотехнической документации (руководство по эксплуатации и описание типа);

• - отсутствие на наружных поверхностях флуориметра повреждений, влияющих на их работоспособность;

• - чистота гнёзд, разъёмов и клемм.

• 8.1.2  Флуориметр считается прошедшим операцию поверки, если он соответствуют всем перечисленным выше требованиям.

Проверить соответствие идентификационных данных программного обеспечения сведениям, приведенным в описании типа на спектрофотометры.

• 8.2.1  Идентификационные данные программного обеспечения флуориметра отражаются в верхней строке главного окна программы Люминесцентный сканер после названия (см. рисунок 2).

• 8.2.2   Флуориметр считается прошедшим операцию поверки, если идентификационные данные программного обеспечения соответствуют значениям, приведенным в таблице 3.

Таблица 3 - Идентификационные данные

• 8.3.1 В интерВейсепрограммы нажать кнопку «Плакшет» фядом с кдопкой «Подключение»). В результате нажатия выдвигается столик флуориметра для размещения планшета (см. рисунок 1).

• 8.3.2 В 96-луночном планшете из комплекта флуориметра заполнить каждую лунку ряда А водой высокой чистоты, из таблицы 2, в объёме 150 мкл, рядов В, С, D растворами № 12, 3 соответственно, в объёме 150 мкл, подготовленными в п. 7.1.

• 8.3.3 Установить планшет на выдвинутом столике флуориметра и нажать клавишу «Планшет», после чего столик с планшетом помещаются в кюветное отделение флуориметра.

• 8.3.4 В главном окне ПО открыть вкладку «Измерения» в режиме «Расширенные» и установить настройки измерений: лунки для анализа - ряды А-D (выбранные лунки окрашиваются в светло-зелёный цвет), режим измерения - Общий, мощность лазера 12 %, нулевая линия - по любой из ячеек А2 - А11, фокусировка - по любой из ячеек В2 - В11.

• 8.3.5 Для запуска измерений нажать кнопку «Старт», после чего открыть вкладку «Результаты» (см. рисунок 3). Измеренные значения сигнала флуоресценции от лунок появятся в виде цифр, располагающихся в соответствующих ячейках таблицы результатов.

  

Рисунок 3 - Результаты измерений

• 8.3.6 Флуориметр считтетсяпрошедшим одерациюпаверки,если знечлния интенсивности в ряду А находятся в диапазоне от минус 20 до плюс 20 услед., в ряду В -в диапазоне от 10000 до 20000 усаед., в ряду С - в диапазоне от 1000 до 2000 усл.од., в ряду D - в диапазоне от 100 до 200 усл.од.

• 8.4.1.1 Изморить на люминесцентном комплексе из состава ГЭТ суммарнуто относительную интенсивность флуоресценции растворов № 1 и № 2 для длины волны возбуждения 445 нм и спектрального диапазона регистрации флуоресцентного сигнала от 470 до 700 нм, Ьт 1 и 1эт2, отн.ед.флуор.

• 8.4.1.2 Рассчитать коэффициент градрчровкч, отн.ед.флуор./усл.ед., на основании результатов измерений, проведённых в соответствии с п.8.3.5, по формуле (1):

ги      ^ЗТ1‘12

Ll₌₁‘ Bi

где In - значение относительной интенсивности в отн.ед.фтуои. для раствора №1, полученное на люминесцентном комплексе из состава ГЭТ в соответствии с п.8.4.1.1;

1*Bi - значение интенсивности сигнала в усл.ед., полученное на флуориметре для ячеек В1-В12 в соответствии с п.8,3.5.

• 8.4.1.3 На основании результатов измерений, полеченных в п.8.3.5, рассчитать средние значения интенсивности сигнала в усл.ед., по формулам (2) и (3):

т _       'Bi

j L               ’

где 1щ - значение интенсивности сигнала в усл.ед., полученное для ячеек В1 - В12;

Ici - значение интенсивности сигнала в ясл.ед.. полученное для ячеек Cl - С12.

• 8.4.I.4 Рассчитаас зитатни.з а_;нтеисивнтстифлус-рсспеяциив ота. ед. флуор. растворов № 1. № 2 в по формулам (4) и (():

h = К •!*,

1? - К • 1с,

г де К - коэффициент градуировки, полученный в п.8.4.1.2.

• 8.4.1.5 Рассчитать значения атносительной пснрешпости провед епровеизмерений интенсивности флуоресценции, %, по формулам (6) и (7):

Д/а =        ■ 100                                (6)

_ ^371

м₂ =       • 100                             (?)

1эТ2

• 8.4.1.6 За оеносиеелноую погрешность измерения йнесоссвоостй флуоресценции принимают наибольшее из значений, полученные в веолветслвйи с п.8.4.1.(.

• 8.4.1.7 Флуориметр считается прошедшими операцию поверки, если значения интенсивности флуоресценции наеедяеся в пределас от 1 до (0 ото.ед.Дляор., а значение олносилелнной погрешности измерений солсосивносес флуоресценции не превышает ± ( %.

• 9.1 Результаты измерений заносятся в протокол (приложение А).

• 9.2 Флуориметр, прошедший поверку с положительным результатом, признается годными и допускается к применению. На него выдается свидетельство о поверке установленной формы и наоосяе знак поверки согласно Приказу Министерства промышленности и торговли Российской Федерации №181( от 02.07.2015 «Об утверждении Порядка проведения поверки средств измерений, требования к знаку поверки и содержанию свидетельства о поверке».

• 9.3 Флуориметр, прошедший поверку с отрицательным результатом, признается непригодными, не допускается к применению. Свидетельство о предыдущей поверке и (или) оттиск поверительного клейма аооялсряюл и выписывают «Извещение о непригодности» с указанием причин в соответствии с требованиями Приказа Министерства промышленности и торговли Российской Федерации №181( от 02.07.2015.

  

ПРИЛОЖЕНИЕ А (Обязательное) к Методике поверки МП 069.Д4-18 «ГСИ. Флуориметр Кристалл-БИО»

ПРОТОКОЛ первичной / периодической поверки от «_______»____________201__года

Средство измерений: Флуориметр Кристалл-БИО_______________________________

(Наименование СИ, тип (если в состав СИ входит несколько автономных блоков

то приводят их перечень (наименования) и типы с разделением знаком «косая дробь» / )

Зав.№_001____________________________________________________________

Заводские номера блоков

Принадлежащее________________________________________________________

Наименование юридического лица, ИНН

Поверено в соответствии с методикой поверки МП 069.Д4-18 «ГСИ. Флуориметр Кристалл-БИО. Методика поверки», утвержденной ФГУП «ВНИИОФИ» 05 октября 2018 г.

Наименование документа на поверку, кем утвержден (согласован), дата

С применением эталонов__________________________________________________

(наименование, заводской номер, разряд, класс точности или погрешность)

При следующих значениях влияющих факторов:

(приводят перечень и значения влияющих факторов, нормированных в методике поверки)

• - температура окружающего воздуха, ос

• - относительная влажность воздуха, %, не более

• - атмосферное давление, кПа

Внешний осмотр______________________________________________________

Проверка ПО_____________________________________________________

Опробование____________________________________________________________

Получены результаты поверки метрологических характеристик:

Таблица 1 - Флуориметр Кристалл-БИО_________________________

Рекомендации___________________________________________________________

Средство измерений признать пригодным (или непригодным) для применения

Исполнители!:___________________________________________________________________

___________________________________________подписи, ФИО, должность

ПРИЛОЖЕНИЕ Б (Обязательное) к Методике поверки МП 069.Д4-18 «ГСИ. Флуориметр Кристалл-БИО»

МЕТОДИКА ПРИГОТОВЛЕНИЯ РАСТВОРОВ

Б.1 Назначение и область применения

Настоящая методика регламентирует процедуру приготовления водных растворов флуоресдеина натрия на основе разбавления УранинаА ТУ 2463-289-00204197-2003 (флуоресцеин натрия высший сорт). Указанные растворы предназначены для испытаний с целью утверждения типа Флуориметра Кристалл-БИО. Значение концентрации флуоресцеина натрия в растворах № 1, 2, 3 составляет 0,1; 0,01; 0,001 мг/дм³ соответственно.

Б.2 Нормы и погрешности

Б.2.1 Характеристики погрешности растворов флуоресцеина натрия оценивают по процедуре приготовления с учетом всех составляющих погрешностей, вносимых на каждой стадии приготовления.

Б.2.2 Настоящая методика обеспечивает получение растворов флуоресцеина натрия с погрешностью значений концентрации флуоресцеина натрия, не превышающих при доверительной вероятности Р=0.95 доверительных интервалов абсолютной погрешности (± Ад) при соблюдении всех регламентированных условий.

Б.З Средства измерений, приборы и реактивы

Б.3.1 Весы лабораторные, класс точности специальный (1) по ГОСТ Р 53228-2008.

Б.3.2 Колбы мерные 2-го класса точности с притертой пробкой по ГОСТ 1770-74 объемом 100 cm ^j;

Стаканчик для взвешивания типа СВ по ГОСТ 25336-82 объемом 18 см '.

Б.3.3 1-канальный механический дозатор с варьируемым объемом дозирования от 1 до 10 см допускаемая систематическая относительная погрешность ± (от 0,6 до 3,0) %, допускаемое СКО от 0,15 до 0,6 %.

1-канальный механический дозатор с варьируемым объемом дозирования от 0,1 до 1,0 см ³, допускаемая систематическая относительная погрешность ± (от 0,6 до 3,0) %, допускаемое СКО от 0,2 до 0,6 %.

1-канальный механический дозатор с варьируемым объемом дозирования от 0,01 до 0,1 см³, допускаемая систематическая относительная погрешность ± (от 0,8 до 3,0) %, допускаемое СКО от 0,2 до 1,0 %.

Или пипетки 2-го класса точности по ГОСТ 29169-91, ГОСТ 29228-91 объемом дозирования от 100 до 1000 мкл.

Б.З.4 Уранина А ТУ 2463-289-00204197-2003 (флуоресцеин натрия высший сорт).

Б.3.5 Вода высокой чистоты по ОСТ В.95.823-95.

Б.4 Требования безопасности

Применение флуоресцеина натрия не требует соблюдения каких-либо специальных мер безопасности. Необходимо соблюдать только требования инструкций безопасности при работе в химической лаборатории.

Б.5 Требования к квалификации оператора

К приготовлению растворов флуоресцеина натрия и вычислениям допускают лиц. имеющих квалификацию инженера-химика или техника-химика и опыт работы в химической лаборатории.

Б.6 Условия приготовления растворов флуоресцеина натрия

Б.6.1 Приготовление расгворов флуоресцеина натрия проводят при соблюдении в лаборатории следующих условий:

• - температура окружающего воздуха от + 15 до +25 °С

• - атмосферное давление от 94 до 106 кПа

• - относительная влажность воздуха не более 80 %

Б.6.2 Приготовленные растворы флуоресцеина натрия следует хранить в колбах с хорошо притертыми пробками при температуре от +15 до +25 °С, вдали от прямых солнечных лучей.

При соблюдении условий хранения растворы флуоресцеина натрия устойчивы в течение 1 года.

Б.7 Приготовление растворов флуоресцеина натрия

В стаканчик для взвешивания, помещённый на чашку лабораторных весов, вводят 0,0023 г флуоресцеина натрия.

Переносят флуоресцеин натрия в мерную колбу вместимостью 100 см³. Доводят до метки водой высокой чистоты, закрывают колбу пробкой и перемешивают содержимое колбы, переворачивая её 10 раз. Полученный исходный раствор имеет концентрацию флуоресцеина натрия 23 мг/дм3.

Из исходного раствора с концентрацией флуоресцеина натрия 23 мг/дм³ готовят растворы флуоресцеина натрия с концентрациями 0,1 мг/дм3 (раствор № 1) и 0,01 мг/дм3 (раствор № 2) посредством отбора аликвот в 435 мм3 и 43 _мм3, соответственно, и переноса их в колбы на 100 см3. Колбы доводят водой высокой чистоты до метки, закрывают колбу пробкой и перемешивают содержимое колб, переворачивая их 10 раз.

Из раствора с концентрацией флуоресцеина натрия 0,01 мг/дм"¹ готовят раствор с концентрацией 0.001 мг/дм³ (раствор № 3) посредством отбора аликвоты в 10 см3 _и переноса её в колбу на 100 см ³. Колбу доводят водой высокой чистоты до метки, закрывают колбу пробкой и перемешивают содержимое колбы, переворачивая её 10 раз.

10