Методика поверки «ГСИ.Приборы для тонкослойной хроматографии с денситометром "Сорбфил"» (МП-242-2435-2021)

Федеральное государственное унитарное предприятие

«Всероссийский научно-исследовательский институт метрологии им. Д.И. Менделеева»

ФГУП «ВНИИМ им.Д.И.Менделеева»

2021 г.

СОГЛАСОВАНО .о. генерального директора

ФГУП «ВНИИМ

.И. Менделеева»

Государственная система обеспечения единства измерений

Приборы для тонкослойной хроматографии с денситометром "Сорбфил"

МЕТОДИКА ПОВЕРКИ

МП-242-2435-2021

И.о. руководителя НПО Госэталонов в области физик^-химич ких измерений ФГУП «ВНИИМ им.

А.В. Колобова

.И. Менделеева»

Ст. научный сотрудник

Санкт-Петербург

2021 г

Настоящая методика поверки распространяется на «Приборы для тонкослойной хроматографии с денситометром «Сорбфил» (далее по тексту - приборы) и устанавливает методы и средства их первичной поверки при вводе в эксплуатацию и после ремонта и периодической поверке в процессе эксплуатации.

Методика поверки должна обеспечивать прослеживаемость поверяемых приборов к государственному первичному эталону ГЭТ 208-2014 «Государственный первичный эталон единиц массовой (молярной) доли и массовой (молярной) концентрации органических компонентов в жидких и твёрдых веществах и материалах на основе жидкостной и газовой хромато-масс-спектрометрии с изотопным разбавлением и гравиметрии»

Метод, обеспечивающий реализацию методики поверки - косвенное измерение поверяемым средством величины, воспроизводимой стандартным образцом.

Методикой поверки не предусмотрена возможность проведения поверки отдельных измерительных каналов и (или) отдельных автономных блоков из состава средства измерений или поверка для меньшего числа измеряемых величин или на меньшем числе поддиапазонов измерений.

1. Перечень операций поверки

Таблица 1 - Операции поверки

При проведении поверки должны быть соблюдены следующие условия:

• 2.1.   Температура окружающего воздуха от +15 до +25 °C.

• 2.2.   Относительная влажность окружающего воздуха от 30 до 80 %.

• 2.3.   Атмосферное давление от 84 до 106 кПа.

• 3.1. К работе с приборами и проведению поверки допускаются лица, ознакомленные с руководством по эксплуатации поверяемого средства измерений и инструкциями (руководствами) по применению средств измерений, стандартных образцов и вспомогательных средств поверки и имеющие квалификацию не ниже бакалавра (инженера) и прошедшие инструктаж по технике безопасности. Для получения данных, необходимых для поверки, допускается участие в поверке оператора, обслуживающего прибор или сервис-инженера (под контролем поверителя).

• 4.1. При проведении поверки применяют средства, указанные ниже.

Таблица 2 - Средства поверки

• 4.1.1. Допускается применение других средств поверки, обеспечивающих определение метрологических характеристик поверяемых приборов с требуемой точностью.

• 4.1.2. Все средства измерений, используемые при поверке, должны быть поверены, а ГСО действующий паспорт.

• 5.1.   При проведении поверки требуется следовать правилам безопасности, изложенным в разделе 1 Руководства по эксплуатации приборов

• 6.1.   При внешнем осмотре устанавливают соответствие приборов следующим требованиям:

отсутствие внешних повреждений, влияющих на работоспособность;

исправность органов управления;

четкость надписей на лицевой панели.

маркировка должна соответствовать требованиям эксплуатационной документации.

• 6.2.   Прибор считают выдержавшими внешний осмотр, если он соответствует указанным выше требованиям.

• 7.1.   Включить питание прибора, следуя порядку действий, указанному в Руководстве по эксплуатации приборов.

12. Прибор включают и устанавливают в режимы работы видимой области и УФ диапазоне на длинах волн 254 и 365 нм. Подготавливают пластину к измерению в соответствии с п. 9.1.1 Помещают пластину с афлатоксином В1 в денситометр.

• 7.3.   Прибор считается выдержавшим опробование, если визуальный анализ пятен на дисплее персонального компьютера наблюдаются пятна контрольного вещества афлатоксина В1.

• 8.1.   Ввод на экран сведений о версиях ПО осуществляется нажатием кнопки «?»; выпадающем контекстном меню необходимо выбрать вкладку «О программе»

• 8.2.   Вид главного окна приведен на рисунке 1. Вид окна информации приведен на рисунке 2.

  Денситометр Сорбфил

  

Файл Редактирование Режим Треки Language ©

В 3 Э & Д              &   \ Вьис. спр.еки.,

,Лу~1осетить наш сайт...

т Проверить новую версию

Рисунок 1 - Главное окно

Адрес Дополнительно Регистрация ©ООО ИМИД, 1999-2017

ИМИД

Т ополиная аллея, 10

350072, Краснодар Россия

Tel/Fax+7-861-252-04-81

Tel +7-861-252-04-02

hllp //www sofbhl com        mail@$orblil com

Рисунок 2 - Окно с версией ПО

• 8.3. Прибор считается выдержавшим проверку по п. 8, если версия ПО не ниже 3.0.0.3036

• 9.1.   Определение отношения сигнал/шум.

  • 9.1.1. Пластину размером 100x100 мм (ПТСХ-АФ-В, ТУ 26-1 1-17-89, для афлатоксина и ПТСХ-АФ-В-УФ, ТУ 26-1 1-17-89, для зеараленона (ГСО 7944-2001) предварительно очищают в ацетоне и сушат при 25 °C до исчезновения запаха ацетона. Очистку проводить элюированием в хроматографической камере при подъеме элюента на всю высоту пластины. На погружаемой в элюент стороне пластины обрезать уголки размером 7x7 мм.

  • 9.1.2. На подготовленную пластину микрошприцем наносят 5 пятен по 2 мкл афлатоксина В1 (ГСО 7936-2001) с расстоянием 20 мм от края пластины и 15 мм между пятнами.

  • 9.1.3. Пластину при нанесении проб располагают на нагревательном устройстве УСП-1 при температуре 55 °C.

  • 9.1.4. В хроматографическую камеру помещают смесь растворителей хлороформ: ацетон: гексан в объёмном соотношении 9:1:1 (36 см³ хлороформа, 4 см³ ацетона, 4 см³ гексана). Время насыщения камеры - не менее 30 мин.

  • 9.1.5. В подготовленную хроматографическую камеру помещают пластину с нанесённым контрольным раствором, элюируют в темноте (высота подъема фронта -60 мм) и затем сушат в течение 5 минут при 25 °C, закрыв от источников света.

  • 9.1.6. Пятна афлатоксина В1 должны светиться ярко синим цветом в УФ диапазоне при длине волны 365 нм.

  • 9.1.7. Подготавливают пластину по п. 9.1.1

  • 9.1.8. На подготовленную пластину микрошприцем наносят 5 пятен по 10 мкл зеараленона (ГСО 7944-2001) с расстоянием 20 мм от края пластины и 15 мм между пятнами.

  • 9.1.9. В хроматографическую камеру помещают смесь растворителей толуол: этилацетат: муравьиная кислота в объёмном соотношении 6:3:1 (30 см³ толуол, 15 см³ этилацетат, 5 см³ муравьиная кислота). Время насыщения камеры - не менее 30 мин.

  • 9.1.10. Помещают пластину в камеру и элюируют

  • 9.1.11. Пятна зеараленона должны быть темными на зеленом фоне подложки в УФ диапазоне при длине волны 254 нм.

  • 9.1.12. Пластину с зеараленоном (ГСО 7944-2001) высушить при температуре 25 °C в течение 5-10 минут.

  • 9.1.13. Опрыскивают пластину проявляющим реагентом (0.5% спиртовой раствор ЖЖ красного прочного) с помощью пульверизатора, входящего в комплект поставки. Обработка проявителем строго после приготовления его раствора.

  • 9.1.14. Обработанную проявителем пластину поместить в шкаф при температуре 105°С на 5 минут.

  • 9.1.15. Пятна зеараленона (ГСО 7944-2001) должны представлять собой пятна желтого цвета, отчетливо видимые в дневном свете.

  • 9.1.16. Регистрацию, измерение сигналов денситометра осуществляют с помощью компьютерной системы обработки хроматографического сигнала, входящей в комплект поставки системы. Запись изображения производить с помощью видеокамеры, высота изображения пластины должна быть равна высоте кадра.

  • 9.1.17. В случае регистрации в видимой области при нанесении на пластину 10 мкл зеараленона (ГСО 7944-2001) с концентрацией раствора 100 мкг/смЗ соотношение сигнал/шум не менее 5/1. Соотношение определяют (рис.1. Приложение 3), используя программное обеспечение “денситометр “Сорбфил” (см. приложение к программному обеспечению).

  • 9.1.18. В случае регистрации в УФ диапазоне при длине волны 254 нм при нанесении на пластину 10 мкл зеараленона (ГСО 7944-2001) с концентрацией раствора 100 мкг/см³ соотношение сигнал/шум должно быть не менее 5/1.

  • 9.1.19. В случае регистрации в УФ диапазоне при длине волны 365 нм при нанесении на пластину 2 мкл афлатоксина В1 (ГСО 7936-2001) с концентрацией раствора 10 мкг/см³ отношение сигнал/шум должно быть не менее 5/1.

• 9.2. Определение относительного СКО выходного сигнала (по площади пика).

  • 9.2.1. Подготавливают пластины к измерению (по п. 9.1.1.)

  • 9.2.2. Регистрацию, измерение площадей сигналов осуществляют в течение 24 часов с момента подготовки пластин.

  • 9.2.3. Регистрацию, измерение площадей сигналов осуществляют в видимой области и в УФ диапазоне при длинах волн 254 и 365 нм с помощью автономного ПО. устанавливаемого на компьютер.

  • 9.2.4. При сканировании пластины определяют площадь всех пяти пятен на пластине и средние их значения для данного сканирования. Сканирования одной и той же пластины проводят 5 раз. Установочный параметр метода калибровки -воспроизводимость. Определяют средние значения площади для всех измерений.

  • 9.2.5. Относительное СКО площади сигналов S вычисляют по формуле:

    

где S и - средние арифметические значения площади соответственно для всех сканирований и сканирования i.

• 10.1 Результаты поверки считаются положительными, если полученные значения отношения сигнал/шум и ОСКО площади пятна, не превышают значений, указанных в таблице 3 и таблице 4.

Таблица 3 - Предельные допускаемые значения метрологических характеристик

Таблица 4 - Относительное СКО выходного сигнала (площади пятна)

• 11.1 Данные, полученные при поверке, оформляются в форме протокола в соответствии с требованиями, установленными в организации, проводящей поверку.

• 11.2 Прибор, удовлетворяющий требованиям настоящей методики поверки, признается годным к применению. Прибор, не удовлетворяющий требованиям настоящей методики, не допускается к применению.

• 11.3  Результаты поверки средств измерений подтверждаются сведениями о результатах поверки средств измерений, включенными в Федеральный информационный фонд по обеспечению единства измерений. По заявлению владельца средства измерений или лица, представившего его на поверку, на средство измерений наносится знак поверки, и (или) выдается свидетельство о поверке средства измерений, и (или) в паспорт средства измерений вносится запись о проведенной поверке, заверяемая подписью поверителя и знаком поверки, с указанием даты поверки, или выдается извещение о непригодности к применению средства измерений.

• 11.4 Знак поверки (по заявлению владельца) наносится на верхнюю панель денситометра и (или) на свидетельство о поверке.

ПРИЛОЖЕНИЕ 1

Приготовление проявляющего реагента

Взвешивают 12,5 мг ЖЖ красного прочного и переносят в мерную колбу 25 см³. Добавляют 50 % этиловый спирт до метки. Массовая концентрация раствора 0.5 мг/см³. Раствор готовят непосредственно перед использованием.

ПРИЛОЖЕНИЕ 2

Метрологические характеристики приборов для тонкослойной хроматографии

с денситометром «Сорбфил»

Таблица 2 - Отношение сигнал/шум

Таблица 3 - Относительное СКО выходного сигнала (площади пятна)

Определение соотношения сигнал/шум при помощи программного обеспечения Денситометра Сорбфил.

Рис. 3 - Определение соотношения сигнал/шум.

10